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背景:何首乌属补益类补血药具有“补肝肾、益精血”功效,课题前期研究明确了何首乌炮制前后补血功效的差异,但其补血机制尚不明确。骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有支持造血,促进造血重建,改善造血微环境等作用,BMSCs是与造血密切相关的细胞。通过研究何首乌炮制前后含药血清及主要化学成分对BMSCs的作用及机制,为何首乌炮制前后补血功效差异提供科学依据。目的:1何首乌炮制前后含药血清及主要化学成分对BMSCs增殖效应。2何首乌炮制前后含药血清及主要化学成分对BMSCs细胞周期的影响。3研究何首乌炮制前后含药血清及主要化学成分对BMSCs细胞凋亡的影响。4从基因水平上探讨何首乌炮制前后含药血清及主要化学成分对BMSCs影响的机制。5从蛋白水平上探讨何首乌炮制前后含药血清及主要化学成分对BMSCs影响的机制。方法:1 MTT法研究何首乌炮制前后含药血清及主要化学成分对BMSCs 24h、48h、72h增殖效应。2利用流式细胞仪考察何首乌炮制前后含药血清及主要化学成分作用BMSCs 24h与48h后细胞周期的影响。3利用流式细胞仪考察何首乌炮制前后含药血清及主要化学成分作用BMSCs 24h与48h后细胞凋亡的影响。4利用RT-PCR方法,考察何首乌炮制前后含药血清及主要化学成分作用BMSCs 48h后对造血相关基因表达的影响。5采用Elisa试剂盒方法检测何首乌炮制前后乌含药血清及主要化学成分作用BMSCs后细胞上清中TPO、Kitlg以及IL-6等细胞因子含量。结果:1生、制何首乌含药血清具有促进BMSCs增殖效应,且制何首乌含药血清增殖效应更为显著;大黄素、大黄素甲醚、大黄酸以及没食子酸可促进BMSCs增殖;5-羟甲基糠醛(5-HMF)与二苯乙烯苷抑制BMSCs增殖。2含药血清能促进细胞进入活跃期,且制何首乌含药血清比生何首乌含药血清有增殖效应更为显著;大黄素与大黄酸在合适浓度具有促进细胞进入活跃期的效应;二苯乙烯苷抑制BMSCs细胞周期;大黄素甲醚、没食子酸与5-HMF对BMSCs细胞周期没有明显的影响。3制首乌含药血清抑制BMSCs细胞凋亡,生首乌含药血清则促进细胞凋亡;大黄素与大黄素甲醚在合适浓度能抑制BMSCs细胞凋亡;二苯乙烯苷促进BMSCs细胞凋亡;大黄酸、没食子酸与5-HMF对BMSCs细胞凋亡没有明显的影响。4含药血清能促进TPO、Kitlg以及IL-6基因表达升高,制首乌含药血清促进作用比生首乌含药血清更为显著,特别是IL-6基因有明显差异;大黄素能显著促进TPO基因的表达;大黄素甲醚显著促进IL-11基因表达;大黄酸明显促进IL-11与Kitlg基因表达;二苯乙烯苷显著性促进Kitlg基因表达,明显抑制TPO与IL-6基因表达。5 TPO细胞因子在BMSCs中少量表达或者不表达,无法检测;Kitlg细胞因子生、制何首乌含药血清组含量升高,大黄素甲醚高浓度作用后Kitlg细胞因子明显升高;含药血清组明显比空白血清IL-6含量高,且制何首乌含药血清组高于生首乌含药血清组,大黄素中浓度与二苯乙烯苷中高浓度作用后IL-6含量明显低于空白组。结论:何首乌炮制后补血功效增强,与制何首乌促进BMSCs增殖密切相关,制何首乌影响BMSCs细胞周期与细胞凋亡是影响BMSCs增殖途径之一,其增殖机制与制何首乌促进BMSCs造血相关基因表达和细胞因子分泌相关。何首乌炮制后大黄素、大黄素甲醚、大黄酸及没食子酸含量增加,促进BMSCs增殖作用效应与制何首乌一致;炮制后含量降低的二苯乙烯苷未显示对BMSCs增殖作用,这一结果进一步阐明何首乌炮制前后药效改变相关的物质基础及炮制机制。