绝缘子SCS’对杆状病毒基因转导载体在哺乳动物细胞系介导基因表达的影响

来源 :复旦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liandakj2005
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杆状病毒(Baculovirus)可以高效地进入多种哺乳动物细胞,并介导基因表达,是新型的基因转导载体。它具有很多优点,如:遗传背景清晰、安全性好、对细胞的毒性小等。同时,杆状病毒基因转导系统也有自身的缺点和不足,包括病毒载体在哺乳动物细胞中不能复制,外源蛋白表达量不高等。本实验研究了绝缘子SCS元件对外源基因在哺乳动物细胞中的表达水平的影响。  绝缘子SCS是最早发现的绝缘子之一,是果蝇在87A7基因位点的下游特化的染色体结构(Specialized Chromatin Structure),简称为SCS。据报道它是染色质的分界元件,有抗基因沉默的功能,可以保护目的基因的表达。  本研究首先提取黑腹果蝇DNA,通过PCR,获得了SCS绝缘子;然后构建了九株重组杆状病毒,它们都带有CMV启动子和报告基因GFP,同时在该表达框的上、下游分别含有不同方向的SCS。分析GFP表达水平发现,九种重组病毒中有一株病毒(命名为vH+,SCS绝缘子在CMV-GFP基因表达框的上游,与CMV启动子的方向相同),感染后24小时,在CHO中检测到GFP表达量比对照病毒有显著提高,提高幅度近3倍。此外,其它几株重组病毒有不同程度的下降,如病毒vS-H+(CMV-GFP基因表达框的下游有绝缘子SCS,与CMV启动子方向相反;上游有绝缘子SCS,与CMV启动子方向相同)GFP表达量比对照病毒下降了3倍多。在其它哺乳细胞系如BHK、CNE等细胞系中SCS绝缘子也能够有相同的作用。  SCS绝缘子对报告基因GFP的mRNA表达有影响。感染后24小时,在CHO中检测到vH+的GFPmRNA表达量比对照病毒提高4倍多,vS-H+的GFPmRNA表达量比对照病毒低5~6倍。  通过加入丁酸钠和TSA等组蛋白脱乙酰基化酶的抑制剂,发现原本比对照GFP表达量降低的vS-H+,表达量大幅上升,并且超过了对照病毒。所以,SCS,绝缘子可能存在非乙酰化的途径提高蛋白的表达。  本研究的结果为优化了杆状病毒-哺乳动物细胞系转导系统提供了一种新的思路,也为进一步研究绝缘子SCS在哺乳动物细胞系的作用机理,如绝缘子的方向性、绝缘子的非乙酰化途径等提供了很好的材料。
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