【摘 要】
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目的:以小鼠足细胞为研究对象,观察达格列净对高糖诱导的足细胞内质网应激和细胞凋亡的影响,为达格列净的临床应用提供参考依据。方法:将冻存于-80℃冰箱的小鼠足细胞MPC-5快速解冻后置于含10%胎牛血清、5.6mmol/L葡萄糖、1%青霉素链霉素双抗和40ng/ml小鼠γ-干扰素的RPMI1640培养液中,33℃、5%CO2培养箱中增值培养。然后置于含10%胎牛血清、5.6mmol/L葡萄糖、1%青
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目的:以小鼠足细胞为研究对象,观察达格列净对高糖诱导的足细胞内质网应激和细胞凋亡的影响,为达格列净的临床应用提供参考依据。方法:将冻存于-80℃冰箱的小鼠足细胞MPC-5快速解冻后置于含10%胎牛血清、5.6mmol/L葡萄糖、1%青霉素链霉素双抗和40ng/ml小鼠γ-干扰素的RPMI1640培养液中,33℃、5%CO2培养箱中增值培养。然后置于含10%胎牛血清、5.6mmol/L葡萄糖、1%青霉素链霉素双抗及不含小鼠γ-干扰素的RPMI 1640培养液,设置条件为37℃、5%CO2的细胞培养箱中分化培养。待10-14天后细胞分化成熟后,将培养的细胞随机分为正常对照组（Con）、高糖对照组（HG,30mmol/L葡萄糖）、甘露醇对照组（Mn,30mmol/L甘露醇）组、达格列净组（Dapa,10mmol/L达格列净）,高糖+达格列净组（HG+Dapa,30mmol/L葡萄糖+10mmol/L达格列净）、甘露醇+达格列净组（Mn+Dapa,30mmol/L甘露醇+10mmol/L达格列净）。每组处理48小时后使用细胞增殖-毒性检测法（CCK-8）检测各组细胞活力,先确定达格列净主要降低的是高糖诱导的足细胞损伤,而非高渗诱导的足细胞损伤;随后使用流式细胞仪检测MPC-5细胞的细胞凋亡率;免疫印迹法检测C/EBP同源蛋白（CHOP）、重链结合蛋白（Bip）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关蛋白（BAX）。结果:与Con组相比,HG组和Mn组MPC-5的细胞活力降低,且跟Mn组相比,HG组的细胞活力下降程度更大。与HG组相比,HG+Dapa组MPC-5的细胞活力升高,与Mn组相比Mn+Dapa组MPC-5的细胞活力升高,但升高程度比HG+Dapa组小。与Con组相比,HG组的CHOP蛋白、Bip蛋白表达升高、Bcl-2/Bax蛋白表达降低,细胞凋亡率增加（均P<0.05）。与HG组相比,HG+Dapa组CHOP蛋白、Bip蛋白表达降低、Bcl-2/Bax蛋白表达升高,细胞凋亡率降低（均P<0.05）,差距均有统计学意义。结论:达格列净对高糖诱导的小鼠足细胞内质网应激与细胞凋亡有保护作用,其机制与调节未折叠蛋白反应,抑制过度的内质网应激进而减少细胞凋亡有关。
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