CK19、P63在超脉冲CO2点阵激光修复兔耳浅表性瘢痕中的表达及影响因素的实验研究

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目的:观察超脉冲CO2点阵激光Active FX、Deep FX治疗兔耳浅表性瘢痕的创面愈合情况并比较湿性创面护理技术和传统外科创面护理技术,创面愈合的差异性。研究CK19、P63在兔耳浅表性瘢痕点阵激光修复中的表达及不同创面护理技术对它们的影响,为临床采用超脉冲CO2点阵激光治疗瘢痕、寻找表皮干细胞参与瘢痕修复的证据。方法:选取新西兰大白兔20只,在兔耳腹侧面制作边长为1.5cm的正方形全层皮肤及软骨膜缺损创面,每只兔耳2个创面,共计80个创面,建立兔耳浅表性瘢痕模型。激光治疗分为两组: UltraPulse CO2Fractional(超脉冲CO2点阵)激光Active FX治疗组和UltraPulse CO2Fractional(超脉冲CO2点阵)激光Deep FX治疗组;激光治疗后创面修复分为两组:传统络合碘治疗方法组和湿润烧伤膏治疗方法组。每天观察创面愈合情况,记录每个创面的愈合时间;收集治疗前、治疗后即刻、1天、4天、7天、14天的瘢痕组织标本作病理组织切片,行HE染色镜下观察,并采用免疫组化检测皮肤干细胞标志分子角蛋白19(cytokeratinsCK19)、转录因子P63的表达,分析超脉冲CO2点阵激光两种不同模式和两种创面修复方法对CK19、P63的影响。结果:1、大体观察:络合碘组Active FX、Deep FX模式治疗后第23天创面开始干燥结痂、第910天痂皮开始脱落、第14天创面愈合,瘢痕较治疗前平整,颜色变浅;湿润烧伤膏组Active FX模式治疗后创面湿润,第23天创面可见散在点状结痂,第56天点状痂皮脱落,Deep FX模式治疗后创面未见明显结痂,治疗后第67天创面上皮化愈合。点阵激光Active FX模式治疗:络合碘组创面愈合时间为(13.7±0.65)天,湿润烧伤膏组创面愈合时间为(10.4±0.80)天,组间差异有统计学意义(P<0.05);点阵激光Deep FX模式治疗:络合碘组创面愈合时间为(9.4±0.28)天,湿润烧伤膏组创面愈合时间为(7.5±0.62)天,组间差异有统计学意义(P<0.05);Active FX模式和Deep FX模式治疗创面愈合时间对比,组间差异有统计学意义(P<0.05)。2、病理组织学观察:胶原纤维束较治疗前排列整齐,纤维束呈均质性红染,纤维细胞少,瘢痕组织内血管少。3、免疫组化观察:Active FX、Deep FX模式治疗后即刻创缘无CK19、P63表达,24小时后CK19、P63表达,湿润烧伤膏组治疗后第4天CK19、P63表达增多,第7天达到高峰,第14天逐渐减少;络合碘组治疗后第4天CK19、P63表达达到高峰,第7天和第14天减少。Active FX模式治疗:湿润烧伤膏组CK19、P63强阳性表达率(70%)明显高于络合碘组(40%、42.5%);Deep FX模式治疗:湿润烧伤膏组CK19、P63强阳性表达率(62.5%、75%)明显高于络合碘组(35%、47.5%)组间差异有统计学意义(P<0.05);Active FX和Deep FX治疗模式之间差异无统计学意义。结论:1.兔耳浅表性瘢痕内有表皮干细胞的存留。2.点阵激光(Active FX和Deep FX)两种治疗模式能对浅表性瘢痕形成微损伤,用湿性医疗技术对治疗创面进行修复,比传统络合碘修复更加保护表皮干细胞,促进创面原位再生修复。同时,创面修复过程中,Deep FX模式治疗后创面愈合比Active FX模式快。3.通过CK19、P63阳性表达的变化,可以认为表皮干细胞在浅表性瘢痕修复过程中起重要作用。4.Active FX和Deep FX两种治疗模式中CK19、P63的表达变化无统计学意义。
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