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目的: 糖尿病肾病(DN)是糖尿病的患者致死、致残的重要原因,发病机制至今未明。针对该并发症的诊断指标也欠准确,尿微量白蛋白(MAU)是目前临床诊断的主要诊断依据之一,但敏感性及特异性均不高。寻找新的糖尿病肾病诊断标志物是目前研究热点之一,包括血清胱抑素C,成纤维细胞生长因子,8-羟基-2-脱氧鸟苷等等。Fetuin-A在诊断或预测糖尿病肾病的价值颇受瞩目,但由于其与多种疾病之间存在不可分割的联系,如肾小管异位钙沉积抑制剂、心脑血管相关疾病及胰岛素抵抗问题等等,其与糖尿病肾病之间联系虽有探索,但缺乏更加详实的研究。本研究旨在明确Fetuin-A在2型糖尿病小鼠肝脏肾脏中的分布状况,并进一步探究Fetuin-A在血液及尿液中的浓度与糖尿病肾病患者病情进展的相关性,试图发现其与糖尿病肾病之间的联系。 实验对象与方法: 1.动物研究 选取8周龄雄性非肥胖2型糖尿病老鼠模型Akita小鼠及正常普通老鼠模型BL6小鼠,每组各5只小鼠,体重在16～21g之间,经过普通饮食饲养2周后,乙醚麻醉后处死,获取两组小鼠肝脏及肾脏匀浆,提取蛋白质,用Western Blot技术观察两组小鼠在肝脏及肾脏中Fetuin-A蛋白的表达情况。 2.临床研究 该实验选择了648名2型糖尿病合并糖尿病肾病的患者,以尿微量白蛋白/尿肌酐比(UAlb/Cre)的水平作为标准分为三组:A1(＜30 mg/g),A2(30-299mg/g),A3(≥300mg/g);根据估计肾小球滤过率(eGFR)的分期分为4组:G1(＞90ml/min/1.73m2), G2(60-89 ml/min/1.73m2), G3(30-59 ml/min/1.73m2),G4(15-29 ml/min/1.73m2),eGFR＜15 ml/min/1.73m2的患者以及正在接受透析治疗的患者被排除在外。收集并记录所有受试者的年龄、体重指数(BMI),测量血压,检测隔夜空腹总胆固醇水平(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、甘油三酯(TG)、尿酸(UA)、血肌酐(SCr)、尿肌酐(UCr)、尿素氮(UN)、血浆血糖(PG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿微量白蛋白(MAU),计算UAlb/Cre(mg/g)、eGFR(ml/min/1.73m2)。采集患者血清、尿液标本冷藏于-80℃冰箱待测,血清及尿液Fetuin-A水平用ELISA方法测定。统计分析采用SPSS统计软件(IBM ver23.0),进行成组设计的多变量逻辑回归分析及KW检验,P＜0.05被认为具有统计学意义。 结果: 1.Western blot结果显示肝脏中Akita小鼠和BL6小鼠的Fetuin-A含量无明显差异,而Akita小鼠肾脏中的Fetuin-A含量要明显较BL6小鼠高。 2.不同分类的糖尿病肾病基本资料对比情况Kruskal-Wallis检验显示,在UAlb/Cre水平的分期(A1、A2、A3)中,收缩压、血肌酐、尿素氮、尿酸、eGFR表现出显著变化(P＜0.001)。在使用eGFR进行的分期(G1、G2、G3、G4)当中,年龄、舒张压、糖化血红蛋白、血浆血糖、血肌酐、尿素氮、尿酸、甘油三酯、低密度脂蛋白、UAlb/Cre表现出较为明显的改变(P＜0.001)。 3.糖尿病肾病血清及尿液Fetuin-A与糖尿病代谢及不同肾病严重程度指标相关情况 糖尿病肾病患者的血清Fetuin-A水平与BMI(r=0.163,P=0.001)、TG(r=0.126,P=0.007)呈正相关,与年龄(r=-0.110,P＜0.001)、HDL-C(r=-0.096,P=0.042)呈负相关,尿液Fetuin-A水平与年龄(r=0.161,P＜0.01)、UAlb/Cre(r=0.397,P＜0.001)、收缩压(r=0.17,P＜0.001)、BUN(r=0.190,P＜0.001)、SCr(r=0.167,P＜0.001)呈正相关,与eGFR(r=-0.192,P＜0.001)呈负相关。应用Kruskal-Wallis检验得出,尿液中的Fetuin-A随着UAlb/Cre的增加而增加(微量白蛋白尿分类比较,P=1.44×10-24,eGFR分类比较,P=7.12×10-9),而血清中的Fetuin-A没有显著变化(P＞0.05)。 多重线性回归逐步回归法分析发现,TG(β=0.125,P＜0.05)、BMI(β=0.124,P＜0.05)是血清Fetuin-A独立影响因素,UAlb/Cre(β=0.669,P＜0.001)、eGFR(β=-0.087,P＜0.05)是尿液Fetuin-A独立影响因素。UAlb/Cre(β=-0.264,P＜0.001)及尿液Fetuin-A(β=-0.143,P＜0.05)是eGFR独立影响因素。 结论: Fetuin-A特异表达于肾脏,罹患糖尿病时肾脏Fetuin-A表达明显升高,尿液中的Fetuin-A可能是预测糖尿病肾病的疾病严重程度新型的生物学指标之一。