庆大霉素免疫分析新方法的研究

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庆大霉素属氨基糖苷类抗生素药物,对革兰氏阳性和阴性菌有极好的抑制作用,广泛应用于医药和兽药领域。随着庆大霉素在国内外畜牧养殖业中越来越广泛地应用,它在动物体内产生残留的问题也日益严重。为探索一种快速而有效的监测动物组织中庆大霉素残留的方法,本实验将庆大霉素分别与牛血清蛋白(BSA),蛋白(OVA)藕联合成免疫原和包被原,制备了针对庆大霉素的多克隆抗体,并利用庆大霉素多克隆抗体建立了庆大霉素残留检测的ELISA方法。免疫新西兰大白兔,经最终免疫后采血获得抗庆大霉素多克隆抗体,并建立了庆大霉素间接竞争性ELISA分析方法,抗体效价可达512000,并对ELISA分析的影响因素如包被时间、竞争时间、pH进行了优化。在最优条件下,建立了庆大霉素的标准抑制曲线和回归方程。结果建立的检测方法检测限0.1ng/ml,IC50为0.98ng/mL,线性范围为0.1~11.1ng/ml。包被原最佳工作浓度为3200,抗体的工作浓度为4000,酶标二抗(羊抗兔Ig G-HRP)最佳稀释浓度为4000。与新霉素、卡那霉素等氨基糖苷类化合物进行交叉反应性试验,交叉反应率均小0.1%。利用庆大霉素抗体建立了试纸条检测方法,检测限为50ng/ml,且与ELISA测定结果相符合。对实际样本添加50ng/g,试纸条检测结果皆为阳性。本论文还对庆大霉素的磁共振检测做了研究,并建立了标准曲线为y=1.775x-2.44,检测范围为0.91-24ng/ml,作为一种新的检测方法具有其它方法不可比拟的优势。
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