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目的：系统性硬皮病(systemic sclerosis, SSc)是一种自身免疫性结缔组织疾病,以自身抗体产生、皮肤及多系统器官进行性纤维化、微血管病变为主要特征,发病率具有明显性别差异,80%以上患者为女性,其发病机制目前尚未完全清楚。有研究发现CD40配体(CD40L)在SSc病人和硬皮病模型小鼠中过度表达,但CD40L在SSc中表达增高的机制尚不清楚。我课题组之前研究发现DNA甲基化抑制剂可激活正常女性原失活的X染色体,导致CD40L过度表达。因此,本课题通过比较男女SSc患者CD40L表达水平和其调控序列DNA甲基化状态,试图探讨SSc患者CD40L增高的原因,为该病发病机制的研究提供新的思路。方法：密度梯度离心法分离26例SSc患者(女16例,男10例)和25例健康对照者(女15例,男10例)的外周血单个核细胞,流式细胞术检测CD4+T细胞中CD40L的表达水平；磁珠分选CD4+T细胞,实时定量聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测CD40L的mRNA表达水平；亚硫酸氢钠测序检测CD4+T细胞中CD40L基因调节序列的甲基化状态。结果：与女性正常对照组相比,女性SSc患者CD4+T细胞中CD40LmRNA的表达水平显著升高(P<0.05),CD40L的蛋白表达水平亦显著升高(P<0.05)；亚硫酸氢钠测序结果显示正常女性CD40L基因调控序列一半呈甲基化,一半呈去甲基化,而正常男性CD40L相同序列大部分呈去甲基化,女性SSc患者CD40L基因启动子和增强子区域平均甲基化水平均显著低于女性正常对照(P<0.001；P<0.001),并且女性SSc患者CD40L启动子和增强子区域平均甲基化水平与其CD40LmRNA表达水平呈显著负相关(r=-0.629,P<0.01；r=-0.727,p<0.01)；男性SSc患者组与男性正常对照组CD40LmRNA(?)口蛋白表达水平均无显著差异(P>0.05；P>0.05),并且两组CD40L基因启动子和增强子区域甲基化程度均较低,其平均甲基化水平无显著性差异(p>0.05；p>0.05)。结论：女性SSc患者CD4+T细胞中CD40L表达显著增高,而男性患者无明显改变；女性SSc患者CD40L基因调控序列低甲基化使原失活的X染色体活化,其上的CD40L基因功能活化,从而导致CD40L过度表达,可能是SSc高发于女性的重要原因之一