研究背景与目的：　　乳腺癌（BreastCancer）治疗取得了显著疗效，当中全身化疗功不可没，它大大减少了复发、转移的几率。然而仍有部分患者出现了复发转移，耐药在其中发挥着主要因素。“逃逸死亡”是肿瘤细胞的恶性特征之一，“促进凋亡”是潜在有效的克服耐药策略。BIM是通过影响细胞凋亡而发挥抑癌作用的一种促凋亡蛋白。研究发现BIM缺失多态性在CML和NSCLC中介导内源性TKI耐药的产生；体外实验，TKI联合ABT737或HDAC能促进BIM表达逆转耐药。与此同时，紫杉醇在乳腺癌治疗中有着基石地位，而BIM缺失多态性在乳腺癌中与紫杉醇内源性耐药的关系及作用机制却未见报道。本研究将为乳腺癌寻找新的预测分子标志物及探索逆转紫杉醇内源性耐药的分子机制，为优化乳腺癌的药物使用提供重要的实验数据。　　研究方法：　　（1）回顾性收集广州医科大学附属肿瘤医院，2008.01至2011.08期间在本院接受乳腺癌根治术的241例乳腺癌患者原发灶标本以及临床诊断、药物治疗及随访资料等临床数据，提取其核酸并采用PCR技术及DNA直接测序分析乳腺癌标本中BIM基因的突变状态，采用Pearsonχ2法，单因素分析采用Kaplan-Meier法及Log-rank检验，多因素分析采用Cox回归分析BIM缺失多态性与临床特征及疗效预后间的关系。　　（2）采用PCR技术及DNA直接测序筛查现有乳腺癌细胞株（MCF7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、T47D、BT549）中BIM基因的突变状态，再以实时荧光定量PCR及WesternBlot方法分别检测BIM在各株乳腺癌细胞中mRNA及蛋白水平的表达情况。　　（3）采用细胞毒性试验（MTT，3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-DiphenyltetrazoliumBromide）方法比较分析BIM缺失型乳腺癌细胞株与BIM野生型细胞株间对紫杉醇药物的敏感性关系。同时，采用实时荧光定量PCR及WesternBlot方法检测BIM缺失型及野生型细胞株在紫杉醇作用下，mRNA及蛋白水平的表达情况。　　（4）紫杉醇联合BIM蛋白模拟剂ABT737逆转BIM缺失多态性介导紫杉醇内源性耐药，采用细胞毒性试验、实时荧光定量PCR等方法验证该联合用药能否逆转紫杉醇内源性耐药机制，是否存在协同抗瘤效应。　　结果：　　（1）回顾性分析乳腺癌根治术的241例乳腺癌病例，其分析结果显示：BIM基因缺失多态性在乳腺癌人群中的发生率为9.95％，且仅与复发转移相关（P=0.001）；而与年龄、是否绝经、肿瘤史、ER、PR、HER-2、淋巴结转移、远处转移、TNM分期无关（P＞0.05）；具备BIM基因缺失多态性的患者中位PFS短于无BIM基因缺失多态性的患者（中位数，20.7个月vs40.8个月，P<0.001），且BIM基因缺失多态性的患者中位OS亦短于无BIM基因缺失多态性的患者（中位数，35.5个月vs48.6个月，P<0.001）。多因素分析结果显示BIM缺失多态性、复发及HER-2为均影响PFS及OS的预后因素。　　（2）PCR结果显示，通过筛查现有乳腺癌细胞株（MCF7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、T47D、BT549）发现T47D、BT549均为BIM缺失多态性（即：突变型），而MCF7、MDA-MB-231、MDA-MB-435则无BIM缺失多态性遗传背景（即：野生型）。为进一步验证结论，DNA直接测序结果显示T47D、BT549为BIM突变型细胞株，其余均为野生型，且与文献报道HCC2279肺癌细胞株相符。　　（3）荧光定量PCR结果显示：5株乳腺癌细胞株中（MCF7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、T47D、BT549），BIM基因中EXON3：EXON4在突变型细胞株T47D中比值高，而在其余细胞株中则比值较低（P＜0.05）。与此同时，Westernblot结果显示：BIM蛋白在突变型T47D中低表达，而在其余细胞株中表达较高。　　（4）进一步验证不同BIM遗传背景的细胞株对紫杉醇药物敏感性的差异，采用不同浓度紫杉醇分别处理突变型T47D及野生型MCF-7，MTT检测细胞活性结果显示：突变型T47D细胞株对紫杉醇的药物敏感性明显降低，与同等药物浓度处理的野生型MCF-7细胞株相比，差异具有显著性（P＜0.05）。结果提示具有BIM缺失多态性的乳腺癌细胞株针对紫杉醇的抗药性明显增加。　　（5）在相同紫杉醇浓度作用下，采用实时荧光定量PCR的方法测定，伴随时间的变化，EXON3:EXON4的比值在突变型及野生型细胞株中变化情况，其结果显示：突变型T47D细胞株中，其E3：E4的比值随紫杉醇作用的时间变化而逐渐增大，而野生型MCF-7细胞株则随时间变化逐渐减小。进一步采用Westernblot测定在相同时间，不同浓度紫杉醇作用下，BIM蛋白表达的变化，其结果显示：其结果提示E3：E4比值的改变及BIM蛋白表达的下调可能参与了BIM缺失多态性的乳腺癌细胞株紫杉醇内源性耐药机制的发生发展。　　（6）紫杉醇联合BIM蛋白模拟剂ABT737逆转BIM缺失多态性介导紫杉醇内源性耐药，细胞毒性试验结果显示：紫杉醇联合ABT737可明显改善突变型T47D细胞株对紫杉醇药物的敏感性。　　结论：　　（1）BIM基因缺失多态性在乳腺癌人群中的发生率为9.95%，且BIM基因多态性的有无对乳腺癌根治术后患者的中位PFS及OS均有统计学差异，且多因素分析结果显示BIM缺失多态性、复发及HER-2均影响PFS及OS，因此BIM缺失多态性对评估乳腺癌患者不良预后具有重要意义。　　（2）BIM基因突变型乳腺癌细胞株相对野生型细胞株对紫杉醇药物敏感性较低，说明BIM缺失多态性可以增强其对紫杉醇药物的耐受性。　　（3）BIM缺失多态性是通过增加BIM基因中mRNAE3：E4的比值，下调BIM蛋白的表达，从而提高了其抗凋亡的能力，增强其对紫杉醇的耐受性。　　（4）紫杉醇联合BIM蛋白模拟剂ABT737可逆转BIM缺失多态性介导紫杉醇内源性耐药机制，具有协同抗瘤效应。