乙型肝炎病毒X蛋白反式调节作用的研究

来源 :中国人民解放军军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:renx2000
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
乙型肝炎病毒(HBV)感染,不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且是肝纤维化和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的主要病因。病毒基因组编码的蛋白通过反式调节宿主肝细胞基因组的表达,调控肝细胞的生长,可能是HBV致病(癌)的重要分子机制之一。HBV基因组具有4个主要的开放读码框架(ORF),分别命名为S、C、P、X区,其中X区编码154个氨基酸残基组成的17.5 kDa的产物-HBx。HBx是一种具有反式调节作用的病毒蛋白质,关于其反式调节作用,来自不同研究小组的实验结果甚至相互矛盾,因此,HBx在病毒复制和发病机制中的确切作用还有待进一步阐明。利用寡核苷酸基因芯片技术对HBx蛋白反式调节靶基因进行新的开拓,全面了解HBx蛋白反式调节作用的靶基因,有助于阐明HBV感染的部分分子生物学机制。 本课题首先应用常规分子生物学技术构建HBx蛋白的真核表达载体pcDNA3.1(-)-X,并将构建好的重组质粒瞬时转染人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞,以空载体为平行对照。应用寡核苷酸基因芯片技术对HBx反式调节的靶基因进行筛选,同时结合生物信息学技术对差异表达的基因进行分析。在筛选的21,329条基因中,有426条差异表达的基因,其中168条基因表达上调,258条基因表达水平下调,这些基因包括许多与细胞生长调节、细胞凋亡、信号转导、免疫反应、物质代谢、细胞分裂周期、肿瘤发生和转移等相关的基因,还包括一些未知功能的新基因,其中之一命名为HBx蛋白反式激活基因11(XTP11)。 为进一步研究细胞中表达的HBx蛋白对抑癌基因p53的调节作用,我们利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独及与pcDNA3.1(-)-X共转染HepG2细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果显示,克隆的p53启动子序列具有激活下游基因转录的活性,当pCAT3-p53p与pcDNA3.1(-)-X共转染时CAT的表达活性明显下降;进一步采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测表明,瞬时转染了pcDNA3.1(-)-X的HepG2细胞中p53基因mRNA表达减少。说明HBx蛋白在转录水平上反式抑
其他文献
结合英国《建筑环境共鸣设计》理论,以空间多维度感知体验为出发点,以渗透可达性、可识别性和内在活力3原则对株洲市神农广场设计进行分析。探析城市广场作为重要的城市公共空
各位代表:$$    今天,大会选举我担任海南省省长,我非常感谢每一位代表对我的信任与支持!我体会到,大家把这张选票投给我,是对我的厚爱、信任,更是对我的期许和希望。 $$   
报纸
人口增长和膳食结构的转型升级将使我国在2030年达到粮食需求的高峰,这给我国粮食安全保障带来巨大挑战。保障粮食安全亟须加强对未来居民食物消费需求变化及其结构特征的研究
报纸
公正的第三方治理模式在体育领域合作秩序的维护中起到了举足轻重的作用。但面对行业自治及自发秩序维护的需求时,便出现难以规避的困境,需要强互惠惩罚的有益补充。强互惠惩
大巴山推覆构造位于秦岭造山带和四川盆地的过渡部位,由拉张盆地、推覆带、活动带、扰动带和主滑面组成。其中活动带与扰动带是油气聚集的有利地区。经重磁资料分析计算,指出
利用毛管模型中双电层理论和阳离子交换量与Zeta电位的关系,确定了毛管内电位与离子浓度的径向分布。依据离子浓度分布与液体传质理论,推导了离子导电岩石的扩散吸附电动势方
高职社会体育专业现代学徒制课程体系构建是保证现代学徒制教学质量的前提与基础。通过行业企业调研,职业岗位确认,职业能力点分析,重构出适应健身行业企业岗位需求的现代学
土中矿物成分的类型与含量是软土物理力学性质研究的基础,可以使用微观试验进行研究。本次研究以上海软土为例,使用X射线荧光(XRF)分析得到土中不同元素的含量,使用X射线衍射
基于电磁感应原理的金属探测技术在探雷领域一直都占有主导地位。介绍了脉冲式电磁感应的基本原理,并在此基础上提出了一种基于时域多时宽双极性脉冲电磁感应的金属探测方法,
针对传统中梯激电效率高、数据量少等特点,提出多极距中梯观测技术,配合现有的多通道发射、接收机,可在不增加太多工作量的情况下,尽可能采集更多的视电阻率和视极化率数据,