【摘 要】
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【目的】盘状结构域受体1(DDR1)是酪氨酸激酶(RTKs)家族的跨膜胶原受体,在上皮细胞中被胶原激活。在肝脏发生纤维化的情况下,DDR1可通过机械重组重建胶原排列。同时,在胶原结合的作用激活下,DDR1发生裂解,随后大量胞外端脱落到血液中。纤维化的肝细胞周围细胞外基质中有大量胶原沉积,由此激活脱落的胞外端DDR1作为细胞外脱落的产物是否可以在血清中检测到,并且作为血清标志物来诊断和肝评估纤维化尚
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【目的】盘状结构域受体1(DDR1)是酪氨酸激酶(RTKs)家族的跨膜胶原受体,在上皮细胞中被胶原激活。在肝脏发生纤维化的情况下,DDR1可通过机械重组重建胶原排列。同时,在胶原结合的作用激活下,DDR1发生裂解,随后大量胞外端脱落到血液中。纤维化的肝细胞周围细胞外基质中有大量胶原沉积,由此激活脱落的胞外端DDR1作为细胞外脱落的产物是否可以在血清中检测到,并且作为血清标志物来诊断和肝评估纤维化尚无相关文献报道。本文通过观察检测血清中脱落的胞外端的浓度与肝纤维化的关系,试图找出预测肝纤维化的新指标。【方法】1、通过使用不同浓度I型胶原刺激以及在不同的时间点刺激过表达DDR1的HEK293T细胞,检测培养基上清中是否存在脱落的胞外端DDR1。使用I型胶原分别在不同时间点刺激小鼠正常肝细胞和人正常肝细胞,观察培养基上清中胞外端DDR1的浓度变化。2、建立BDL和CCL4小鼠肝纤维化模型,观察肝组织纤维化的程度变化以及I型胶原沉积情况,并检测纤维化程度与血清中胞外端DDR1浓度关系。3、收取肝硬化病人组织标本观察病理变化,同时收集正常人与肝硬化病人的血清进行检测,比较血清中胞外端DDR1浓度差异。【结果】1、使用胶原I分别在0、2、4、6、8h以及0、25、50、75ug/ml不同浓度胶原I处理HEK293T细胞系。同时在50ug/ml浓度的胶原I分别0、4、8、18、24h刺激小鼠和人正常肝细胞系,发现胞外端的DDR1脱落随着胶原处理时间的延长以及浓度增加而增加。2、胶原沉积与体内肝纤维化程度有关:在CCL4和BDL小鼠模型中,分别处理0、6、9、12周和2、5、10、15天后,组织病理发现随着处理时间延长肝纤维化逐渐加重并且胶原沉积随着纤维化加重而增多,同时血清胞外端DDR1含量随之上升。3、随着初步临床研究发现:通过对56例肝纤维化病人以及200例非肝纤维化的正常人研究发现,肝纤维化病人标本按照Laennec分级分类研究发现肝内胶原纤维沉积随分级严重程度增加而增多,同时肝硬化病人血清中胞外端DDR1含量明显高于非肝硬化病人。【结论】本研究发现随着纤维化加重在肝脏周围胶原纤维沉积增多,同时胶原刺激脱落的胞外端盘状结构域受体1在血清中增多,通过对肝纤维化病人和非肝纤维化正常人研究表明血清中胞外端盘状结构域受体1含量可以作为新的预测肝纤维化的血清学标志物。
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