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目的从参与变应性鼻炎免疫应答的固有淋巴细胞ILC2入手,研究麻黄细辛附子汤治疗变应性鼻炎发挥抗过敏效应的优势环节,并深入挖掘本方干预ILC2细胞的潜在作用靶点,使其分子机制得到进一步阐明。结合课题组前期研究基础,将固有免疫与适应性免疫两方面的研究对接,为麻黄细辛附子汤临床治疗变应性鼻炎提供更充足的科学依据,开拓变应性鼻炎临床论治思路。方法选用雄性C57BL/6J小鼠60只,体重25±5克。分别进行随机分组:空白对照组;模型对照组;氯雷他定组;麻黄细辛附子汤低浓度组,麻黄细辛附子汤中浓度组,麻黄细辛附子汤高浓度组。每组10只小鼠,适应性饲养1周后进行变应性鼻炎造模。OVA造模:在第1、3、5、7、9、11、13天,用150μg的OVA(加佐剂50ul)腹腔注射初次致敏;第15-21天,连续7天,500μg OVA进行滴鼻激发。第29-42天,每组分别用相应的中药进行灌胃,第43天处死小鼠,进行相关检测。HE染色检测各组动物肺组织、鼻粘膜组织中ILC2细胞的表达,流式分选ILC2细胞,酶联免疫吸附技术检测各组动物血清中IL-4,、IL-5和IL-13的表达水平,WB检测麻黄细辛附子汤对ILC2细胞STAT5,STAT6磷酸化程度的影响,RT-PCR方法检测各组小鼠肺组织、鼻粘膜中ILC2细胞相关因子的基因表达水平,如转录因子GATA-3、RORα、ID2。结果1、成功建立变应性鼻炎小鼠模型。用OVA致敏,小鼠过敏行为学评分明显变化(P<0.01)。用麻黄细辛附子汤干预后,其过敏行为学评分显著下降(P<0.01)。麻黄细辛附子汤浓度进一步增大,对小鼠过敏行为的抑制就越明显。2、观察肺组织外观及肺组织病理变化,发现在不同浓度的麻黄细辛附子汤的干预下,小鼠肺组织的病变情况都有缓解,中药浓度越高,肺组织的病理改善越明显。3、麻黄细辛附子汤对小鼠血清IL-4的影响:麻黄细辛附子汤低浓度下即可使IL-4的含量显著下降,低、中浓度组两组之间没有显著差异。而进一步增加麻黄细辛附子汤的浓度,则可使IL-4的含量显著下降(P<0.01)。4、麻黄细辛附子汤对小鼠血清IL-5、IL-13的影响:麻黄细辛附子汤不同浓度的组别之间,低浓度组与中、高浓度组相比,IL-5的含量有显著差异(P<0.01),而麻黄细辛附子汤中浓度组与麻黄细辛附子汤高浓度组之间则没有显著差异(P>0.05)。对于IL-13的影响则更明显,麻黄细辛附子汤不同浓度的组别之间,均具有显著性差异(P<0.01),且麻黄细辛附子汤浓度越高,IL-13的含量越低。5、免疫荧光双染实验检测鼻粘膜组织中ILC2细胞的表达,在模型对照组ILC2细胞数量显著增多。在麻黄细辛附子汤低浓度组ILC2细胞没有明显减少,在中浓度组,也可见较多的ILC2细胞;在高浓度组,视野中未发现ILC2细胞。6、流式细胞术检测ILC2细胞在肺组织的分布含量与鼻粘膜相比其绝对值明显增多,相比于鼻粘膜,ILC2细胞在肺组织处的分布具有绝对优势。在小鼠鼻粘膜及肺组织中,随着中药浓度的升高,ILC2细胞在鼻粘膜处的表达显著下降,均具有统计学差异(P<0.05)。7、麻黄细辛附子汤对小鼠鼻粘膜组织中ILC2细胞转录因子表达的影响:根据麻黄细辛附子汤给药浓度的不同,对变应性鼻炎模型小鼠鼻粘膜组织中ID2mRNA的表达没有发生显著的差异,不具有统计学意义(P>0.05)。对于GATA-3mRNA的表达,随着中药给药浓度的增加,GATA-3mRNA在小鼠鼻粘膜的表达依次降低,且不同的中药浓度组之间的GATA-3mRNA表达具有统计学差异(P<0.05)。RORαmRNA也会随着中药浓度的改变而发生改变,在变应性鼻炎模型小鼠鼻粘膜组织中RORαmRNA的表达与麻黄细辛附子汤的给药浓度呈反相关(P<0.05)。8、麻黄细辛附子汤对小鼠肺组织中ILC2细胞转录因子表达的影响:GATA-3mRNA、RORαmRNA会随着给药浓度的不同而呈负相关,而ID2mRNA在三组不同浓度情况下的表达改变并没有非常显著,仅在麻黄细辛附子汤低浓度组与麻黄细辛附子汤高浓度组之间存在差异,且具有统计学意义(P<0.05)。结论1、成功建立用OVA致敏的变应性鼻炎小鼠模型。麻黄细辛附子汤对其过敏行为有显著的改善。2、麻黄细辛附子汤可改善OVA致敏模型小鼠肺部的病理情况,缓解血管内充血和水肿,减少炎性细胞的浸润,缩小炎症区域。3、麻黄细辛附子汤对ILC2细胞分泌的细胞因子IL-5、IL-13有显著的抑制作用。4、麻黄细辛附子汤可减少小鼠鼻粘膜、肺组织中ILC2细胞的聚集。且随着麻黄细辛附子汤浓度的增加,对鼻粘膜和肺组织中ILC2细胞数量的影响更显著。5、麻黄细辛附子汤对pSTAT5/STAT5表达的影响没有显著差异(P>0.05),但可以显著降低pSTAT6/STAT6的表达,且具有显著统计学差异(P<0.01)。6、随着麻黄细辛附子汤浓度的增加,对小鼠鼻粘膜和肺组织的GATA-3mRNA、RORαmRNA均有显著的抑制作用,并且浓度越高,GATA-3mRNA、RORαmRNA表达越少。说明不同浓度的麻黄细辛附子汤可使ILC2细胞特有的转录因子表达下降,进一步说明麻黄细辛附子汤可干预ILC2细胞的表达而发挥抗炎抗过敏的作用。