全氟化碳对脂多糖诱导急性肺损伤A549细胞表面活性蛋白的影响

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目的:经全氟化碳(perfluorocarbon,PFC)治疗脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致急性肺损伤(acute lung injury, ALI)A549细胞模型,探讨PFC对ALI人肺泡上皮细胞表面活性蛋白的影响。方法:实验共分为四组:(1)、空白对照组(C组):含有A549细胞(106/ml)的培养液;(2)、脂多糖组(L组):含有A549细胞(106/ml)的培养液加入10ug/ml脂多糖溶液;(3)、全氟化碳组(P组):含有A549细胞(106/ml)的培养液加入30%(V/V%)全氟化碳溶液;(4)、脂多糖+全氟化碳组(L+P组):含有A549细胞(106/ml)的培养液加入10ug/ml脂多糖及30%(V/V%)全氟化碳溶液。各组实验标本均设定6个观察时间点:1h、2h、3h、4h、5h、6h,每个时间点配制为总体积1ml混合溶液装入离心管(1.5ml),经超声振荡三次,每次振荡5秒钟,间隔20秒,分别于每个时间点提取A549细胞(离心5000rpm×5min),-20℃保存备实验用。第一部分:(1)、应用实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,q-PCR)检测技术分别检测C组与L组炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达情况,确定ALI细胞损伤模型的建立;(2)、将P组按PFC浓度分别为10%、30%、50%、70%分成四个亚组,与C组对照进行实验并应用q-PCR技术检测表面活性蛋白SP-D和相关蛋白TTF-1mRNA表达情况,确定PFC的作用浓度。第二部分:分别应用q-PCR、Western blot和ELISA技术检测各实验分组细胞裂解液中表面活性蛋白SP-A、SP-B、SP-C、SP-D的表达情况。第三部分:应用q-PCR技术检测各实验分组细胞裂解液中表面活性蛋白相关的蛋白ABCA3、TTF-1的mRNA表达情况。结果:(1)、IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达在2h至6h期间各时间点L组较C组明显增强。30%PFC亚组与50%PFC亚组较C组SP-D mRNA、TTF-1mRNA表达明显增强,70%PFC亚组SP-D mRNA、TTF-1mRNA表达较其他各组明显降低。(2)、与L组比较,L+P组SP-A在2h时间点,SP-B、SP-C、SP-D在3h时间点的mRNA表达明显增强,细胞裂解液中蛋白含量增加。(3)、ABCA3mRNA在2h、3h时间点L+P组较L组表达增强;TTF-1mRNA在3h时间点L+P组较L组表达增强。结论:(1)、PFC作用于LPS致ALI-A549细胞模型,使该模型中SP-A、SP-B、SP-C、SP-D四种表面活性蛋白的mRNA和蛋白表达水平均有升高。(2)、应用PFC作用于LPS致ALI-A549细胞模型,促进了该模型中ABCA3、TTF-1的mRNA表达;上述两种蛋白mRNA表达与其各自分别对应的SP mRNA表达结果一致,同时证实了前期有关SP实验部分的结果的准确性。(3)、以上结果排除了PFC本身作用的因素,考虑为PFC改善肺损伤的作用结果,其作用机制尚有待进一步研究。
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