论文部分内容阅读
恩诺沙星((Enrofloxacin，Enro)是一种动物专用药物，属于氟喹诺酮类(Fluoroquinolone，FQs)药物，为人工合成的新型广谱杀菌抗菌药物，广泛用于水产及畜禽养殖，已经成为我国目前常用的鱼药和兽药之一。但恩诺沙星的大量不合理使用，使其成为残留问题最为严重的兽药。人类食用被污染的动物食品后，可导致机体内正常菌群产生耐药性；引起人的中毒或者过敏反应；影响体内核酸的合成；以及引起癌变。美国、欧盟、日本等国家包括我国都对恩诺沙星的使用做了严格的规定。美国现在已经禁止使用恩诺沙星，欧盟规定在可食性动物组织中恩诺沙星的最高残留限量(MRL)为30ug／kg。 在进出口检疫过程中，恩诺沙星兽药残留检测一直是重点。因此建立快捷、有效的检测方法，对于完善检测体系，保证进出口贸易的正常有序进行具有重要的意义；对于限制恩诺沙星的不合理使用、保证饮食安全、提高人民生活水平也起到重要的作用。 国内外已建立了很多理化方法检测动物性食品中残留的恩诺沙星。虽然有些方法比较灵敏、精确，但由于花费大、时间长、技术要求高等原因而不适合大批量样品的筛选。作为一种快速、灵敏、特异的方法，酶联免疫吸附测定法正逐渐应用于药物的残留检测。酶免疫技术是将抗原抗体结合反应的特异性与酶促反应的灵敏性相结合的一种检测方法，选择性、灵敏度都很高，具有常规理化分析技术无法可比拟的优越性，非常适用于复杂基质中痕量组分的分析。 单克隆抗体是利用细胞融合技术，使骨髓瘤细胞和免疫动物淋巴细胞融合而成杂交瘤细胞所产生的一种特异性高度专一和化学性高度纯一的抗体。与多克隆抗体相比，它是只针对一个抗原决定基产生的抗体，其结构相同、成分均一、特异性强、生物活性高，与其它抗原没有或极少交叉反应等明显的优点。 本实验首先以牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白，与Enro偶联合成免疫抗原Enro-BSA；同样的方法，以卵清白蛋白(OVA)为载体蛋白，使之与Enro偶联合成检测抗原Enro-OVA。并且进行紫外光谱扫描，动物实验及偶联比计算等方面的鉴定。 然后以Enro-BSA为免疫抗原，免疫8周龄Balb／c系小鼠，经过四次免疫后，将小鼠断尾采血，以Enro-OVk为检测抗原，用间接ELISA法选出血清具有抗Enro的阳性鼠，取阳性小鼠的脾细胞与SP2／0细胞用50％PEG-1400进行融合。通过检测、克隆、筛选步骤，最终筛选出一株分泌抗Enro单克隆抗体的细胞株3D6。此细胞株有96条