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目的基于SIRT1-HIF-1α-VEGFA信号转导通路探讨羟基红花黄色素A（Hydroxysafflor Yellow A,HSYA）对氧糖剥夺/复糖复氧（Oxygen Glucose Deprivation/Reoxygenation,OGD/R）损伤大鼠脑微血管内皮细胞（Brain Microvascular Endothelial Cells,BMECs）的血管新生调控作用及作用机制。方法1.HSYA对OGD/R损伤大鼠BMECs的血管新生调控作用1.1 BMECs的原代分离、培养和鉴定（1）通过酶消化法提取原代大鼠BMECs并常规培养;（2）通过光学显微镜观察细胞形态并采用Ⅷ因子相关抗原细胞免疫荧光染色法鉴定BMECs;1.2 OGD/R模型的建立将第3代BMECs用磷酸盐缓冲液（Phosphate buffer solution,PBS）漂洗2次后,加入无糖培养基并置于预先调试好的37℃恒温缺氧小室（95%N2、5%CO2）2h,随后用高糖培养基替代无糖培养基并在37℃、5%CO2的常氧恒温培养箱中复糖复氧24 h,建立OGD/R损伤模型;1.3采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、血管生成素（Angiopoietin,Ang）和血小板衍生生长因子（Platelet-derived growth factor,PDGF）水平;1.4蛋白免疫印迹法（Western-Blotting）检测细胞中VEGFA、Ang-2和PDGFB蛋白的表达;1.5采用CCK-8法检测细胞增殖;1.6使用细胞粘附检测试剂盒检测细胞粘附性能;1.7采用细胞免疫荧光染色法检测细胞血管新生标记因子CD34、CD31的表达;1.8通过细胞划痕实验检测细胞迁移;1.9通过Transwell小室检测细胞迁移;2.HSYA对OGD/R损伤大鼠BMECs的血管新生调控作用机制研究2.1 Real-Time PCR技术检测细胞中SIRT1、HIF-1α和VEGFA m RNA的水平;2.2 Western-Blotting法检测细胞中SIRT1、HIF-1α和VEGFA蛋白的表达;结果1.HSYA对OGD/R损伤大鼠BMECs具有血管新生调控作用（1）细胞形态学观察结果显示,提取的原代细胞在第6 d开始呈现长梭形,继续培养至第10 d,细胞呈现铺路石样;Ⅷ因子相关抗原细胞免疫荧光染色法鉴定结果显示,提取的原代细胞胞质内发出明显绿色荧光,细胞核经DAPI复染呈蓝色。（2）ELISA检测结果显示,OGD/R造模后,细胞上清液中VEGF、Ang和PDGF的水平增加,而HSYA能进一步增加细胞上清液中VEGF、Ang和PDGF的水平;（3）Western-Blotting结果表明,OGD/R造模后,细胞中VEGFA、Ang-2和PDGFB蛋白的表达升高,而HSYA能进一步升高VEGFA、Ang-2和PDGFB蛋白的表达;（4）CCK-8法检测结果显示,OGD/R使细胞活力降低,而HSYA能够显著增加OGD/R诱导的BMECs的细胞增殖;（5）细胞粘附检测结果表明,OGD/R使细胞粘附性能降低,而HSYA能够显著增加OGD/R诱导的BMECs的细胞粘附性能;（6）细胞免疫荧光染色法检测结果显示,与正常对照组相比,OGD/R组细胞血管新生标记因子CD34、CD31有所表达,而HSYA组细胞CD34、CD31因子表达明显增加;（7）细胞划痕实验与Transwell小室迁移实验结果表明,HSYA能够显著增加OGD/R诱导的BMECs的细胞迁移;2.HSYA通过SIRT1-HIF-1α-VEGFA信号转导通路调控OGD/R损伤大鼠BMECs的血管新生（1）Real-Time PCR检测结果表明,与正常对照组相比,OGD/R组细胞中SIRT1m RNA的相对表达量显著降低,而HIF-1α和VEGFA m RNA的相对表达量显著升高;与OGD/R组相比,HSYA组细胞中SIRT1、HIF-1α和VEGFA m RNA的相对表达量均显著升高;与HSYA组相比,当抑制剂EX-527与HSYA合用时,SIRT1、HIF-1α和VEGFA m RNA的相对表达量均显著降低;当激动剂白藜芦醇（Resveratrol,RSV）与HSYA合用时,SIRT1、HIF-1α和VEGFA m RNA的相对表达量均显著升高;（2）Western-Blotting结果表明,与正常对照组相比,OGD/R组细胞中SIRT1蛋白的相对表达量显著降低,而HIF-1α和VEGFA蛋白的相对表达量显著升高;与OGD/R组相比,HSYA组细胞中SIRT1、HIF-1α和VEGFA蛋白的相对表达量均显著升高;与HSYA组相比,当抑制剂EX-527与HSYA合用时,SIRT1、HIF-1α和VEGFA蛋白的相对表达量均显著降低;当激动剂RSV与HSYA合用时,SIRT1、HIF-1α和VEGFA蛋白的相对表达量均显著升高;结论综合上述实验结果表明,HSYA对OGD/R损伤大鼠BMECs的血管新生具有调控作用,该作用可能是通过SIRT1-HIF-1α-VEGFA信号转导通路促进血管生成来发挥抗损伤作用。