背景卵泡发育过程、机制一直是国内外的研究热点之一,一批批卵泡被募集,或被选择形成优势卵泡,或闭锁,其机制尚不明确。颗粒细胞增殖、分化通过细胞连接相互沟通信息,并向卵细胞提供刺激成熟的信号,从而影响卵母细胞成熟和排卵。颗粒细胞间,颗粒细胞与卵母细胞间借助于粘附分子相互粘附、传达信息,影响着卵泡的发育。钙粘素是其中主要粘附分子。钙粘素(cadherin)是细胞粘附分子(cell adhesion molecules, CAMs)的一种,是一种钙依赖的跨膜糖蛋白,钙粘素的胞膜内部分高度保守,并与细胞内骨架相连。参与细胞的识别,活化和信号传导,细胞增值与分化,细胞的伸展与运动,免疫应答,炎症发生,凝血,肿瘤转移,创伤愈合等一系列重要生理和病理过程。至今已鉴定出的钙粘素有30种以上,分布于不同的组织,主要有上皮型钙粘素(E-cadherin, CD324/CDH1).神经型钙粘素(N-cadherin, CD325/CDH2)等。钙粘素介导的同型钙粘素细胞间的粘附作用,对组织和器官的发育及完整组织结构的维持起重要作用。在胚胎发育生殖腺形成过程中,通过同型粘附分子介导不同类型的细胞按既定规律形成细胞与细胞,细胞与基质的有序粘附、分离、迁移、再粘合,形成器官、组织。卵泡分化和生长的过程开始于胎儿卵巢,卵泡在生理周期发育过程中经历的膨大生长、排卵、闭锁、黄体形成、退化等过程中涉及细胞增生、分裂、粘附、迁移、卵巢局部组织结构重塑,呈现出不同类型的钙粘素的时空变化表达。粘附功能的变化伴随卵巢组织发展和重建,卵泡颗粒细胞的增殖,分化。研究表明N-cadherin涉及细胞间粘附和组织形态发生,也参与信号转换,以影响各种细胞功能。N-cadherin在各卵泡阶段颗粒细胞中均有表达,早、中期黄体均有显著表达.N-cadherin胞外区域和成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)受体的结构相似(两者含有共同的保守HAV区域)。bFGF能影响原始卵泡向初级卵泡转化。在原始卵泡阶段,卵母细胞分泌碱性成纤维生长因子(bFGF)和生长分化因子-9(GDF-9)以及骨形态发生蛋白-15(BMP-15)等,由此促进颗粒细胞的增殖。另外N-cadherin相互结合启动信号转导级联,经cAMP途径可抑制颗粒细胞凋亡,调控卵泡闭锁,维持、促进卵泡生长发育。N-cadherin介导的细胞接触可使颗粒细胞表面G蛋白配体与G蛋白相关受体(GPRS)结合影响卵细胞,使卵母细胞表面的FGF受体激活,抑制cAMP-磷酸二酯酶,细胞内cAMP水平下降,维持在基础cAMP水平,以防止生发泡破裂,阻滞减数分裂。FSH和LH对卵泡发育的调节作用很大程度上借助于cAMP依赖的信号转导系统。在LH刺激下cAMP升高,促进卵子的减数分裂。动物实验显示E-cadherin主要存在于卵巢窦卵泡前的颗粒细胞中,随着卵泡发育,E-cadherin表达被抑制,在窦卵泡后颗粒细胞中表达极少,排卵卵泡有微量表达,而在黄体成熟过程中在黄体颗粒细胞表达逐渐增多。钙粘素在始基卵泡的表达变化提示E-cadherin可能参与早期卵泡生长始动的调节。近年来卵巢局部微调节在卵泡生长发育中的作用越来越受到关注,卵巢局部产生的许多细胞因子参与调节卵泡的发育过程。而粘附分子在卵泡发育中的作用,人们尚知之甚少。目前关于钙粘素与卵泡发育之间关系的研究主要局限于动物实验,鲜有对人展开研究。国外在这方面的研究不多,国内在这方面更是空白。本研究通过测定因输卵管性、男性因素不孕超排卵者卵泡不同反应组卵泡液中的钙粘素和性激素水平,以及因PCOS行超排卵者卵泡液中的钙粘素和性激素水平,进行统计分析,以探讨钙粘素在卵泡发育中的作用。资料与方法1.研究对象自2007年10月一2009年5月因输卵管性不孕或者男性因素不孕在浙江大学附属妇产科医院辅助生殖中心行IVF-ET者,随机收集了其中的70例。以及因PCOS不孕(按照鹿特丹会议诊断标准)行IVF-ET者18例。行基础激素水平测定,包括基础促卵泡激素(bFSH).输卵管性不孕或者男性因素不孕常规体外受精或卵胞浆内单精子注射的患者超排卵采用长周期方案。按取卵时平均直径>14mm的卵泡数目不同进行分组,卵泡数≤5个为卵巢低反应组,卵泡数6-20个为正常反应组。≥21个为卵巢高反应组。PCOS组行递减方案。2.标本收集在阴道B超指导下取卵时,留取第一个穿刺卵泡澄清不带血卵泡液(取卵时选择卵泡直径1.8-2.0cm的卵泡)经3000r/min离心10mmin后,取上清液-70℃贮存待测,共取卵泡液88例。记录双侧卵巢直径14mm以上的卵泡数。3.标本测定酶联免疫分析(ELISA)检测卵泡液上皮型钙粘素cadherin (epithelial cadherin, E-cadherin)、神经型钙粘素(neural cadherin,N-cadherin)水平。雌二醇、孕酮测定均采用免疫化学发光法(Chemiluminescence,CL).4.统计学方法所有均数数据以X±S表示,采用SPSS17.0软件,对输卵管性不孕、者男性因素不孕组bFSH、FSH用量、卵泡液N-cadherin、卵泡液E-cadherin、卵泡液雌二醇、卵泡液孕酮、获卵数、成熟卵数、受精卵数在输卵管性、男性不孕的卵泡不同反应组多组间行单一因素方差分析。并就输卵管性、男性因素不孕组全部病例bFSH、FSH用量、雌激素、孕酮、N-cadherin与E-cadherin两两变量间的相关分析采用Pearson相关分析。对输卵管性、男性因素不孕组和PCOS组卵泡液N-cadherin、卵泡液E-cadherin、卵泡液雌二醇、卵泡液孕酮在组间行两样本t检验。所有率的比较选用卡方检验。P<0.05时为差异有显著性。结果输卵管性、男性不孕组不同反应组各项指标比较(X±S)：(1)低反应组基础FSH (8.50±3.29IU/1)显著高于正常反应组(5.58±1.7IU/1)、高反应组(4.38±1.27IU/1),P=0.038及0.023,P<0.05。(2)低反应组FSH用量(3227.50±1513.39IU)显著高于正常反应组(2059.38±481.57IU)、高反应组(2065.00±636.20IU),P=0.031及0.033,P<0.05。(3)卵泡液中高反应组N-cadherin(240.48±49.35ng/ml)显著高于正常组(196.44±46.30ng/ml)、低反应组(197.41±60.88ng/ml), P=0.036及0.043, P<0.05。(4)卵泡液中低反应组E-cadherin(13.74±5.46ng/ml)显著高于正常反应组(8.30±4.26ng/ml),高反应组(10.67±4.06ng/ml) P=0.029及0.046,P<0.05。(5)卵泡液中雌二醇高反应组(45.01±39.86105pg/ml)显著高于正常组(8.98±3.84105pg/ml),低反应组(9.13±4.02105pg/ml), P<0.001及0.001,P<0.01。(6)卵泡液中孕酮低反应组(18740.00±4743.30ng/ml)显著高于正常组(13625.00±4477.38ng/ml)、高反应组(10376.00±2144.20ng/ml), P=0.029及<0、001,P<0.05。(7)FSH用量与卵泡液E-cadherin值存在正相关性,r=0.407,P<0.01。输卵管性、男性不孕组与PCOS组各项指标(X±S)：(1)卵泡液N-cadherin PCOS组显著高于输卵管性、男性不孕组,P<0.05。(2)输卵管性、男性不孕组卵泡液中孕酮显著高于PCOS组,P<0.05。各组获卵数、成熟卵数、受精卵数等比较：(1)低反应组获卵数明显少于其他各组,平均获卵数低反应组、正常反应组、高反应组间均有显著差别,P<0.05。PCOS组因例数较少,未具体细分出低反应组、正常反应组、高反应组,其综合平均获卵数类同于正常反应组。(2)由于获卵基数不同,各组平均成熟卵数差别较大。PCOS组未具体细分出低反应组、正常反应组、高反应组,其综合平均成熟卵数类同于正常反应组。(3)由表中显示正常反应组未成熟卵率高于其他组,但经卡方检验P>0.05,差异无统计学意义,有待于扩大样本量进一步验证。(4)由表中显示低反应组过熟卵率高于其他组,且有低反应组>正常反应组>高反应组>PCOS组趋势,经卡方检验P<0.05,差异有统计学意义。(5)由于获卵基数不同,各组平均受精卵数差别较大。PCOS组未具体细分出低反应组、正常反应组、高反应组,其综合平均受精卵数类同于正常反应组。但受精卵率经卡方检验P>0.05,差异无统计学意义,有待于扩大样本量进一步验证。(6)妊娠率(PR)正常反应组较其他组均高,P<0.05,但本研究样本数较小,有待于扩大样本量进一步验证。结论(1)卵巢高反应组患者、PCOS患者卵泡群发的发生机制具有相似性,与卵局部N-cadherin的高表达有关。(2) E-cadherin高水平可能与低反应组卵泡发育受阻有关。