美花筋骨草化学成分及部分药理研究

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美花筋骨草为唇形科筋骨草属植物美花圆叶筋骨草Ajuga ovalifolia Bur.et Franch.var.calantha(Diels)C.Y.Wu et C.Chen的干燥全草。味甘、苦,性温,具有补骨生髓,燥黄水等功效;常用于治疗关节积黄水、骨质疏松导致的发炎、骨折挫伤及风湿关节痛等症,四川藏医还用美花筋骨草止血。本论文在前期研究基础上对美花筋骨草进行了体外抑菌,抑制斑马鱼血管生成的活性部位筛选,对美花筋骨草的化学成分进行了系统研究,以期为进一步对其质量控制及药效研究提供物质基础。实验分为三部分,叙述如下:第一部分,以金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌(ATCC25922)、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌为指标,通过琼脂扩散法研究美花筋骨草70%甲醇提取液的不同萃取物的体外抗菌活性。实验表明:1.美花筋骨草石油醚萃取物,乙酸乙酯萃取物对金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌具有抑菌活性,正丁醇萃取物与水部位浸膏对所试菌株没有抑制作用;2.石油醚萃取物对金黄色葡萄球菌的最佳抑菌浓度为125.69 mg/mL,抑菌圈直径为12.5 mm,最小抑菌浓度<1.98 mg/mL;乙酸乙酯萃取物对金黄色葡萄球菌的最佳抑菌浓度为128.84mg/mL,抑菌圈直径为11 mm,最小抑菌浓度为8.05 mg/mL,且存在一定的剂量依赖性;3.二者对表皮葡萄球菌有比较明显抑制作用但随剂量变化不明显,石油醚萃取物对表皮葡萄球菌的最佳抑菌浓度>506.36 mg/mL,抑菌圈直径>10.5 mm,最小抑菌浓度<1.98 mg/mL;乙酸乙酯萃取物对金黄色葡萄球菌的最佳抑菌浓度>515.34 mg/mL,抑菌圈直径>11 mm,最小抑菌浓度为4.02 mg/mL。结果表明,美花筋骨草石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌具有体外抑菌活性。第二部分,通过抑制斑马鱼血管生成模型研究了美花筋骨草的不同提取部位对斑马鱼血管生成的影响并进行了有效组分测试,结果表明美花筋骨草石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物具有明显的抑制作用,进一步对乙酸乙酯萃取部位的不同组分Fr.4~Fr.20做活性测试,组分Fr.5~7、10、11、14具有较强的抑制活性,组分Fr.8、18、19的抑制效果更佳,其中组分Fr.8和Fr.19的最低抑制浓度达到6.25μg/mL。第三部分,对美花筋骨草的化学成分进行了分离纯化,通过一系列色谱分离手段从中分离鉴定出32个化合物,包括亚油酸(1),异香草乙酮(2),(16S)-12,16-epoxy-11,14-dihydroxy-17(15→16)-abeoabieta-8,11,13-triene-7-one(3),3-O-乙酰齐墩果酸(4),α-亚麻酸(5),9-羟基-5,7-豆甾二烯-4-酮(6),3-(4-甲苯氧基)-丙酸(7),峰斗菜内酯-E(8),1-(4-羟基-苯基)-乙酮(9),(R,E)-8-acetoxy-2,6-dimethyloct-2-enoic acid(10),S-(+)-dehydrovomifoliol(11),(3S,5R,6S,7E)-5,6-epoxy-3-hydroxy-7-megastigmen-9-one(12),pubincrnoid A(13),4-羟基-3,5-二甲氧基苯乙酮(14),金合欢素(15),4-(hydroxymeth5-dimethylcyclopent-2-enone(16),黑麦草内酯(17),(S,E)-6-hydroxy-2,6-dimethylocta-2,7-dienoic acid(18),伞形花内酯(19),异黑麦草内酯(20),连翘脂素(21),1-(4-hydroxyphenyl)-ethanol(22),(E)-8-hydroxy-2,6-dimethyloct-2-enoic acid(23),1H-吲哚-3-羧酸(24),ajugarin I(25),ajugalactone(26),木犀草素(27),benzyl-4’-hydroxy-benzoyl-3’-O-β-D-glucopyranoside(28),8-O-乙酰哈巴苷(29),20-hydroxyecdysone(30),6-deoxy-8-acetylharpagide(31),爪钩草苷(32)。其中,包括5个脂肪酸类;2个二萜类;1个三萜类;3个为紫罗兰酮型倍半萜;4个内酯类;2个黄酮类;2个植物甾醇类;1个木脂素类;3个环烯醚萜苷类;5个酚酸类衍生物及其他类型的化合物。化合物10、16为首次分离得到的天然产物,化合物2、6~8、10~18、20~24、28共19个化合物为首次从筋骨草属植物中分离得到,1、2、4~8、10~25、28~32共28个化合物为首次从美花筋骨草植物中分离得到。对分离鉴定出的化合物进行HPLC溯源追踪,初步判断化合物14、16、18、19、23、26、27、29均存在于原药材中,为该植物的8个主要成分,该实验为进一步对美花筋骨草的质量控制与药效研究提供了物质基础。
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