乙烯是调控植物生长发育的一种重要激素，植物内源乙烯的生物合成、信号转导和生物效应的调控研究一直是一个热门课题。乙烯生物合成的途径已经阐明，而乙烯信号转导系统的研究则刚刚起步，且主要集中在拟南芥上。但拟南芥无法作为果实尤真是呼吸跃变型果实（如番茄）的成熟模型。 本课题在克隆番茄乙烯受体基因LeETR1和LeETR2部分特异序列的基础上，首次将乙烯受体基因LeETR1 mRNA和LeETR2 mRNA的表达和反义抑制结合起来研究，使研究的结果能够比较全面地反映LeETR1和LeETR2的功能特性。主要结果如下： 1．采用RT-PCR从番茄组织总RNA中克隆了LeETR1和LeETR2的3’-端部分序列，所克隆的LeETR1和LeETR2 cDNA的长度分别为313bP和265bp。通过序列测定证明与文献报导的相同。以克隆的DNA序列为探针进行LeETR1 mRNA和LeETR2 mRNA表达的核酸酶保护分析（RPA）时，分别只产生单一的特异带，说明克隆的DNA序列具有高度特异性。 2．采用RPA方法对番茄乙烯过表达单基因突变体Epi和野生型VFN8中LeETR1 mRNA表达特征的研究表明，在正常番茄中LeETR1 mRNA不受内源乙烯含量的影响，呈组成型表达。LeETR1 mRNA在Epi部分组织中的表达强度发生了改变，这些表达强度的改变与Epi的形态特征变化相吻合，提示LeETR1在叶片的形态建成和果实成熟中可能起着重要的作用。 3．采用RPA方法对番茄乙烯过表达单基因突变体Epi和野生型VFN8中LeETR2 mRNA表达特征的研究表明，在所有被检组织中LeETR2 mRNA均表达。真表达丰度在叶组织中呈发育调节模式，但不受内源乙烯含量的影响；而在果实成熟后期受乙烯的轻微诱导。LeETR2的这种表达模式明显有别于其他乙烯受体基因。实验结果提示LeETR1、LeETR2和已知的诱导型乙烯受体LeETR3（NR）可能分属不同的乙烯受体系统，它们在番茄乙烯信号转导中起着不同的作用。 4．我们以不同番茄品种（9551、T9253、Estrella、9209、B1）的子叶为外植体，以附加适当配比BA和IAA的改良MS培养基（MS无机组分+B5有机组分）为分化培养基，以不加激素的改良MS培养基为生根培养基，建立了具有高效芽再生和生根频率的番茄再生体系。番茄品种9551、T9253、Estrella、9209和B1的最 适分化培养基上附加的激素分别为BAZ．sing几n 刀m叭、 BAZ刀mg／L＋IAAO．Zing／L、BAZ．smgiL＋IAAO．4mg／L、BAZ刀mg／L＋IAAO．4mg／L、 BAZ．sing／L0．4mg／L；在最适培养基上它们的芽分化频率分别为 92．4％、 88．5％、gi石％、89．2％和94．1％。 5．外植体尤其是下胚轴外植休的放置方式对分化频率有明显的影响。采用下 胚轴作外植体时，一定要正向放置，否则苗再生的频率会严重下降。 6．番茄品种 9551、T9253、Estrella、9209和 BI对卡那霉素（Xill）的敏感 性不同。9551、T9253、Estrella和 9209在附加 25mg／L loll的培养基上其分化即完 全受抑制，而抑制番茄 BI的再生则需要附加 100mg／L loll。 7．以中间表达载体 pPZPll IA为基础，以克隆的乙烯受体基因 LeETRI fD LeETRZ的特异序列为目的插入DNA，构建了反义表达载体pPZPEI和 pPZPEZ。 通过PCR和酶切验证，表明 LeETRI和 LeETRZ的反义表达载体己经构建成功，并 己转入农杆茵中，为下一步的番茄转基因研究奠定了基础。 8．以 7－9 日龄的番茄 BI无菌苗子叶为外植体，根癌农杆菌 LBA4404 OPZPEI）、LBA4404OPZPEZ）、EHA105toPZPEI）％D EHA105 toPZPEZ）为介导，采 用叶盘转化法进行了反义LeETRI和反义LeETRZ的遗传转化研究。在筛选压力为 Km 100mg／L的分化培养基和筛选压力为 M 50mg／L的生根培养基上，2种反义转 基因番茄各获得了082％和0．91％的阳性转化苗再生频率：通过PCR和Southern blot的结果证明，己经获得了反义LeETRI和反义LeETRZ的转基因番而檀株。亲代 的转基因番茄目前在温室中生长良好。同时在进行遗传转化的过程中，我们也对农 杆菌的类型、农杆茵的浸染方式、共培养及预培养时间等多种因素对转化效率的影 响进行了研究。证明LBA4404和E皿105都可有效地进行番茄的遗传转化 9．对亲代转基因番茄生长特性的初步研究表明，两种转化植株都表现出了一 定的抗裹老特性，但初步观察真结果率低于末转化番茄。转化番茄与对照相比在生 长特性上的这些差异，预示着乙烯受体基因LETR！和LETRZ与番茄的叶片生长和 果实发育过程相夫，这一结果与我们前面对LeETRI tnRNA和LeETRZ m洲A表达 特性的研究结果相吻台。提示与诱导型的乙烯受体LeETR3（NR不同，LeETRI和