【摘 要】
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[目的]分析子痫前期胎盘组织和正常妊娠胎盘组织中lncRNA的表达谱数据,挑选出差异表达的lncRNATINCR,并进一步研究差异表达的TINCR对子痫前期胎盘滋养细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。[方法]1.通过RNA测序技术检测了 3例子痫前期胎盘组织标本和3例正常妊娠胎盘组织标本中lncRNA的表达谱数据,并将差异表达的lncRNA与lncRNA共表达的mRNA构建lncRNA-mRN
【基金项目】
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国家自然科学地区基金（81760273）； 国家自然科学地区基金（81360103）； 云南省生物资源数字化开发应用（202002AA100007）；
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[目的]分析子痫前期胎盘组织和正常妊娠胎盘组织中lncRNA的表达谱数据,挑选出差异表达的lncRNATINCR,并进一步研究差异表达的TINCR对子痫前期胎盘滋养细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。[方法]1.通过RNA测序技术检测了 3例子痫前期胎盘组织标本和3例正常妊娠胎盘组织标本中lncRNA的表达谱数据,并将差异表达的lncRNA与lncRNA共表达的mRNA构建lncRNA-mRNA共表达网络,通过对网络分析筛选出表达谱中处于核心位置的lncRNA TINCR。对与lncRNA共表达的mRNA进行GO富集分析和KEGG信号通路分析,进而预测子痫前期胎盘组织中差异表达的lncRNA的潜在功能。2.为了研究TINCR对胎盘滋养细胞的生物学功能的影响,我们构建TINCR过表达慢病毒和敲低TINCR的靶向siRNA。将TINCR过表达慢病毒和siRNA转染到人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo中,通过qRT-PCR检测过表达和敲低TINCR的效率。3.采用CCK-8实验检测过表达和敲低TINCR对HTR-8/SVneo细胞增殖能力的影响,划痕实验检测过表达和敲低TINCR对HTR-8/SVneo细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测过表达和敲低TINCR对HTR-8/SVneo细胞浸润能力的影响。4.Western blot检测过表达和敲低TINCR后HTR-8/SVneo细胞中EMT相关标志物 E-cadherin、Vimetin、Fibronectin 和 N-cadherin 的表达水平。5.不同浓度的维生素D刺激HTR-8/SVneo细胞24h后,通过RNA测序技术分析各组细胞的全基因组表达情况。然后将不同浓度维生素D刺激的细胞与对照组的测序结果相比较,筛选出差异表达的基因,并通过PPI分析挑选出可能的潜在分子标志物。GO和KEGG富集分析预测差异基因可能参与的信号通路。[结果]1.通过对3例子痫前期胎盘组织标本和3例正常妊娠胎盘组织标本的基因表达谱数据进行差异表达分析,共获得132个差异表达的lncRNA和389个差异表达的mRNA。lncRNA-mRNA共表达网络分析筛选出在网络中处于关键位置的lncRNATINCR。通过对差异表达lncRNA共表达mRNA的GO富集分析和KEGG信号通路分析提示了这些差异表达的lncRNA在调控细胞增殖和浸润等方面发挥重要作用。2.CCK-8实验证实过表达TINCR可以抑制胎盘滋养细胞的增殖,而敲低TINCR能促进HTR-8/SVneo细胞的增殖。划痕实验证明过表达TINCR可以抑制HTR-8/SVneo细胞的迁移,而敲低TINCR能促进HTR-8/SVneo细胞的迁移。Transwell实验结果证明过表达TINCR可以抑制HTR-8/SVneo细胞的浸润,而敲低TINCR能促进HTR-8/SVneo细胞浸润。3.WB实验证实过表达TINCR后上皮细胞标志物E-cadherin表达增加,而间质细胞标记物Vimetin、Fibronectin和N-cadherin表达水平则降低。而敲低 TINCR 后 E-cadherin 表达降低,而 Vimetin、Fibronectin 和 N-cadherin表达水平增加。4.通过分析不同维生素D刺激后各组的基因表达谱数据,筛选出各组差异基因,并对差异基因进行PPI网络分析筛选出了可能作为分子标志物的核心基因。GO和KEGG富集分析发现差异基因可富集在与免疫、炎症和血管生成相关的信号通路。[结论]LncRNA TINCR可以通过调控胎盘滋养细胞的增殖、迁移和侵袭过程参与子痫前期的发生;TINCR可能通过调控EMT相关标志物的表达来影响EMT进程进而参与子痫前期的发生。维生素D刺激后胎盘滋养细胞的基因表达水平出现明显的差异;维生素D可能通过调控免疫、炎症和血管生成相关的信号通路影响胎盘滋养细胞的增殖、迁移和侵袭过程,进而参与子痫前期的发生。
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