论文部分内容阅读
瘙痒是人体的一种最基本的躯体感觉,是机体的一种自我保护机制,但持久顽固的、或超过人体忍耐限度的瘙痒,常常给患者带来极大的精神上和躯体上的痛苦。临床缺乏安全、有效的特异性治疗。MJS是一种天然黄酮类化合物,有研究表明MJS具有良好的镇痛作用,其机制可能与抑制瞬时受体电位香草酸受体(Transient receptor potential V1,TRPV1)有关。我们预实验研究发现,MJS 可以明显减少小鼠组胺瘙痒模型的瘙痒次数,本课题旨进一步研究MJS对小鼠实验性瘙痒的抑制作用及其可能的作用机制。目的:探讨MJS对小鼠实验性瘙痒的抑制作用及其可能的作用机制。方法:1.小鼠急性瘙痒模型:分别采用颈背部皮下注射组胺(Histmine,hist)、血清素(5-hydroxytryptamine,5-HT)、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)的方法制备小鼠急性痒模型,颈背部皮下注射致痒物质Hist(200μg/kg)、5-HT(20μg/只)、ET-1(50ng/只)前30分钟尾静脉注射给予MJS(7.50mg/kg),记录统计颈背部皮下注射致痒物质后30分钟内每5分钟的小鼠后肢抓挠的次数及30分钟内小鼠抓挠的总次数。2.小鼠慢性瘙痒模型:采用连续颈背部皮肤涂布化学刺激剂的方法制备小鼠慢性干性皮肤病瘙痒模型(Acetone ether and water,AEW),使用在丙酮和乙醚1:1混合液中完全浸润的棉花敷在小鼠颈背部剃毛后的裸露皮肤30秒,之后立即用蒸馏水浸润的棉花敷在相同位置15秒。以上操作每天两次,连续重复7天,每天采用视频记录瘙痒情况。MJS(15.00、7.50、3.75mg/kg)从造模第4天起每天腹腔注射连续注射7天,注射时间为每天第一次造模前90分钟,记录行为学视频的时间是每天第一次造模前60分钟。3.采用药理学手段干预小鼠慢性AEW瘙痒模型:另取小鼠45只,分为正常组、AEW模型组、H1受体拮抗剂氯苯那敏(Chlorpheniramine,CLP,10mg/只)组、TRPV1 受体阻断剂辣椒平(Capsazepine,CPZ,20μg/只)组和 MJS(7.50mg/kg)组,给药时间为第造模第3-6天,记录每天的行为学视频,记录时间、给药时间同上,实验结束后分别取小鼠造模处皮肤组织进行HE染色观察病理组织学变化;取小鼠L2、L3背根神经节(Dorsal root ganglion,DRG)免疫荧光双标检测H1受体和TRPV1受体的表达;免疫印迹(Westernblot,WB)检测造模处皮肤组织H1受体和TRPV1受体的表达。结果:MJS(7.50mg/kg)能显著抑制Hist、5-HT、ET-1引起的小鼠急性瘙痒的抓挠次数;MJS(15.00、7.50、3.75mg/kg)能显著抑制AEW慢性痒模型引起的抓挠;CLP(10mg/只)、CPZ(20μg/只)、MJS(7.50mg/kg)能显著抑制 AEW 慢性瘙痒引起的抓挠。免疫荧光双标结果显示,在L2、L3段DRG神经元细胞中,H1R和TRPV1受体共表达。AEW模型组TRPV1平均荧光强度明显高于正常组,而与AEW模型组相比,CLP组、CPZ组和MJS组均无统计学差异。HiR的平均荧光强度五组均无统计学差异。WB结果显示,皮肤组织AEW模型组TRPV1的灰度值高于正常组,而与AEW模型组相比,CLP组、CPZ组和MJS组均未见差异,H1R的灰度值五组均无统计学差异。结论:MJS能抑制Hist、5-HT、ET-1引起的急性瘙痒;MJS能抑制AEW模型引起的慢性瘙痒;TRPV1在AEW所致慢性瘙痒中起重要作用,HiR可能不参与AEW所致慢性瘙痒的传导;MJS抑制瘙痒作用可能与抑制TRP通路有关,待进一步深入研究。