牛副结核病是由副结核分支杆菌(Mycobacterium avium subsp.Paratuberculosis,MAP)引起的慢性增生性肠炎,主要表现为肠道出现浆液性分泌物,伴随长期腹泻以及体况不良,有时危及病畜生命,使畜牧业遭受经济损失。国外是强制通报的传染病,我国定为二类动物疫病。新疆地区牛场时有该病发生,但存在临床与其他疾病易混淆,难于鉴别诊断的问题。本项研究对新疆不同地区牛场血清进行抗体检测,对临床疑似病例进行分子生物学诊断,探索建立该病的血清学ELISA检测方法,为该病的诊断和防控提供技术支持。目的:调查新疆不同地区牛场牛副结核病血清抗体阳性情况,利用分子生物学方法诊断牛副结核病疑似病例,掌握临床该病流行和发病情况;筛选副结核分枝杆菌重要抗原蛋白,建立该病抗体检测的间接ELISA方法,为建立适合本地区的牛副结核病的诊断方法提供参考意见。方法:1.采集新疆石河子、沙湾、奎屯等13个地区的牛场血液样本681份进行抗体检测;2.对临床64份疑似发病牛粪便样本进行PCR法检测;3.分析牛副结核分枝杆菌重要抗原蛋白表位构建串联重组蛋白MAP3290-1595表达载体,转化大肠杆菌经IPTG诱导表达;4.通过Western Blot和间接ELISA方法验证重组蛋白MAP3290-1595反应原性;5.棋盘方阵滴定法筛选基于重组蛋白建立的间接ELISA方法最优条件。结果:1.新疆不同地区牛副结核病血清抗体平均阳性率为6.17%(42/681),不同地区存在差异;2.对临床疑似病例PCR检测阳性率81.25%(52/64),阳性基因片段经测序确定均为Mycobacterium avium subsp.Paratuberculosis,且7个序列同源性100%;3.成功诱导表达和纯化串联重组蛋白MAP3290-1595,浓度为0.430 mg/mL,纯度大于90%;4.Western Blot和间接ELISA方法证实重组蛋白MAP3290-1595与牛副结核阳性血清具有较好反应原性。5.初步筛选出重组蛋白建立的间接ELISA方法最优条件。结论:1.新疆不同地区牛场均存在牛副结核病感染情况,临床腹泻病牛中感染牛副结核分枝杆菌比例较高;2.成功表达牛副结核分枝杆菌串联重组蛋白MAP3290-1595,初步建立了MAP抗体间接ELISA检测方法。为该病在新疆地区诊断和防控提供基础数据。