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目的:分析Nrf2蛋白与TLRs在不同类型中耳炎中耳粘膜组织的表达差异及Nrf2与TLRs在慢性化脓性中耳炎中表达水平的相关性。阐述慢性化脓性中耳炎中耳粘膜组织中Nrf2的表达与慢性化脓性中耳炎发病进程之间的关系。探讨Nrf2与TLR4表达模式对慢性化脓性中耳炎中耳粘膜组织中促炎细胞因子的影响。在此基础进一步探究Nrf2调控TLR4轴对慢性化脓性中耳炎的发病进程中内在调控机制,为揭示慢性化脓性中耳炎发病进程,急性中耳炎到慢性化脓性中耳炎过度的潜在分子机制奠定科学基础。方法:第一部分:（1）利用RT-q PCR法检测慢性化脓性中耳炎（CSOM）,中耳炎后遗疾病（DOM）,非中耳炎（Non-OM）患者中耳组织中Nrf2和TLRs（TLR2,TLR4,TLR5和TLR9）的表达水平差异。（2）为了验证RT-q PCR结果的准确性,利用Western blot法检测上述三种中耳炎中耳组织中的Nrf2和TLRs的表达水平差异。（3）采用Persson相关性分析法分析慢性化脓性中耳炎中Nrf2和TLR4表达水平的相关性及相互作用。第二部分:（1）利用RT-q PCR法检测CSOM,DOM,Non-OM中耳组织中促炎细胞因子（TNF-α,IL-1β,IFN-γ和IL-6）的差异表达。（2）采用ELISA法验证上述RT-q PCR结果的准确性。分析慢性炎症在CSOM,DOM,Non-OM中表达水平的意义。第三部分:（1）建立高剂量脂多糖（LPS）诱导的AOM小鼠模型和持续低剂量LPS诱导的CSOM小鼠模型。采用Western blot法检测AOM,CSOM,Control三组中耳组织中促增殖相关蛋白（Cyclin D1和CDK2）和促凋亡蛋白（裂解的Caspase-3和Bax）蛋白水平的差异。（2）采用RT-q PCR法检测AOM,CSOM,Control三组中耳组织中促炎细胞因子表达水平差异;采用ELISA法验证上述RT-q PCR结果的准确性。（3）采用RT-q PCR法检测AOM,CSOM,Control组中耳组织中Nrf2和TLR4表达水平差异;采用Western blot法验证上述RT-q PCR结果的准确性。（4）验证Nrf2的敲低效率和TLR4过表达效率,采用RT-q PCR法检测Nrf2在CSOM,COSM+KD-Nrf2中耳组织中表达水平差异和TLR4在CSOM,COSM+OE-TLR4中耳组织中表达水平差异。（5）采用RT-q PCR法检测CSOM,COSM+KD-Nrf2,Control中耳组织中TLR4表达水平差异;采用Western blot法验证上述RT-q PCR结果的准确性。采用RT-q PCR法检测CSOM,COSM+OE-NTLR4,Control中耳组织中Nrf2表达水平差异;采用Western blot法验证上述RT-q PCR结果的准确性。（6）采用RT-q PCR法检测CSOM,COSM+OE-NTLR4,COSM+KD-Nrf2,Control中耳组织中促炎细胞因子表达水平差异;采用ELISA法验证上述RT-q PCR结果的准确性。（7）验证Nrf2过表达的效率和TLR4敲低效率,采用RT-q PCR法检测Nrf2在AOM,AOM+OE-Nrf2中耳组织中表达水平差异和TLR4在AOM,AOM+KD-TLR4中耳组织中表达水平差异。（8）采用RT-q PCR法检测AOM,AOM+OE-Nrf2,AOM+KD-TLR4,Control中耳组织中促炎细胞因子表达水平差异;采用ELISA法验证上述RT-q PCR结果的准确性。结果:第一部分:（1）Nrf2在CSOM中耳粘膜组织中表达水平显著高于DOM,Non-OM组,P<0.01,差异具有统计学意义;而在DOM,Non-OM组中表达水平差异无统计学意义;TLR4在CSOM中耳粘膜组织中表达水平显著低于DOM,Non-OM组,P<0.01,差异具有统计学意义;而在DOM,Non-OM组中表达水平差异无统计学意义;TLR2,TLR5和TLR9在CSOM,DOM,Non-OM中耳组织中表达水平差异无统计学意义。（2）采用Western blot法检测结果与RT-q PCR法检测结果完全一致。（3）Nrf2与TLR4在CSOM中耳组织中表达水平有显著统计学相关性（Pearson相关系数为0.608,P<0.0001）,呈负相关。第二部分:（1）RT-q PCR结果显示促炎细胞因子（TNF-α,IL-1β,IFN-γ和IL-6）在CSOM中耳组织中表达水平显著高于DOM,Non-OM组,P<0.01,差异具有统计学意义;而在DOM,Non-OM组中表达水平差异无统计学意义。（2）采用ELISA法检测结果与RT-q PCR法检测结果完全一致。第三部分:（1）使用高剂量LPS建立AOM小鼠模型,持续低剂量LPS建立CSOM小鼠模型,促增殖相关蛋白（Cyclin D1和CDK2）在CSOM,AOM组织中表达水平显著低于Control组,P<0.01,差异具有统计学意义;而在CSOM,AOM组中表达水平差异无统计学意义。促凋亡蛋白（裂解的Caspase-3和Bax）在CSOM,AOM组织中表达水平显著高于Control组,P<0.01,差异具有统计学意义;而在CSOM,AOM组中表达水平差异无统计学意义。（2）RT-q PCR结果显示促炎细胞因子在CSOM中耳组织中表达水平显著高于AOM,Control组,P<0.01,差异具有统计学意义;而在Control,AOM组中表达水平差异无统计学意义。采用ELISA法检测结果与RT-q PCR法检测结果完全一致。（3）Nrf2在小鼠CSOM中耳粘膜耳组织中表达水平显著高于AOM,Control组,P<0.01,差异具有统计学意义;而在AOM,Control组中表达水平差异无统计学意义;TLR4在小鼠CSOM中耳粘膜耳组织中表达水平显著低于AOM,Control组,P<0.01,差异具有统计学意义;而在AOM,Control组中表达水平差异无统计学意义;采用Western blot法检测结果与RT-q PCR法检测结果完全一致。（4）验证Nrf2敲低和TLR4过表达载体传染率,Nrf2在CSOM+KD-Nrf2中耳组织中表达水平显著低于CSOM组,P<0.01,差异具有统计学意义;TLR4在CSOM+OE-TLR4中耳组织中表达水平显著高于CSOM组,P<0.01,差异具有统计学意义。（5）TLR4在CSOM+KD-Nrf2中耳组织中表达水平显著高于CSOM组,P<0.01,差异具有统计学意义;而在Control,CSOM+KD-Nrf2组中表达水平差异无统计学意义;采用Western blot法检测结果与RT-q PCR法检测结果完全一致。Nrf2在COSM+OE-TLR4,CSOM组中耳组织中表达水平差异无统计学意义,P>0.01;Nrf2在COSM+OE-TLR4组中表达水平显著高于Control组,差异具有统计学意义,P<0.01;采用Western blot法检测结果与RT-q PCR法检测结果完全一致。（6）RT-q PCR结果显示促炎细胞因子在CSOM中耳组织中表达水平显著高于CSOM+KD-Nrf2,CSOM+OE-TLR4,Control组,P<0.01,差异具有统计学意义;而在CSOM+KD-Nrf2,CSOM+OE-TLR4组中表达水平差异无统计学意义。采用ELISA法检测结果与RT-q PCR法检测结果完全一致。（7）验证Nrf2过表达,TLR4敲低载体在AOM小鼠中耳组织中的转染率,Nrf2在AOM+OE-Nrf2组中表达水平显著高于显著高于AOM组,P<0.01,差异具有统计学意义;TLR4在AOM+KD-TLR4组中表达水平显著低于AOM组,P<0.01,差异具有统计学意义。（8）RT-q PCR结果显示促炎细胞因子在AOM+KD-TLR4,AOM+OE-Nrf2组中耳组织中表达水平显著高于AOM,Control组,P<0.01,差异具有统计学意义;而在AOM+KD-TLR4,AOM+OE-Nrf2组中表达水平差异无统计学意义。采用ELISA法检测结果与RT-q PCR法检测结果完全一致。结论:（1）Nrf2在CSOM中耳组织中高表达与CSOM发病进程有关。TLR4在CSOM中耳组织中低表达与CSOM发病进程有关。Nrf2与TLR4在CSOM中耳组织中表达水平呈负相关。Nrf2靶向下调TLR4促成CSOM的发病。（2）促炎细胞因子（TNF-α,IL-1β,IFN-γ和IL-6）在CSOM中高表达与CSOM的发病进程有关,CSOM中存在慢性炎症。Nrf2/TLR4通路在CSOM中维持慢性炎症,然而慢性炎症在CSOM发病进程中起至关重要的作用。（3）Nrf2在CSOM中耳组织中高表达与CSOM发病进程有关。Nrf2靶向调控TLR4,并且在CSOM中对TLR4表达起负调控,但TLR4水平的改变不影响Nrf2表达水平。Nrf2靶向下调TLR4通过维持慢性炎症,促成CSOM的发病进程。TLR4在调节CSOM进程中显示TLR4高表达消除CSOM的慢性炎症,而敲低TLR4则促进AOM-CSOM的转变,表明TLR4的减弱促成CSOM的发病机理。敲低Nrf2可减轻CSOM的慢性炎症,并且Nrf2高表达促进AOM的慢性炎症,表明Nrf2在AOM过渡CSOM过程中起推动作用。综上所述,敲低Nrf2通过上调TLR4逆转慢性炎症,从而减缓CSOM的发病进程。这项研究揭示AOM-CSOM过度的潜在机制并可能为临床CSOM的治疗提供潜在的生物制剂。