四倍体小麦“Langdon”低分子量谷蛋白Glu-3位点的BAC序列分析

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低分子量麦谷蛋白(Low-molecular-weight glutenin subunit,LMW-GS)是小麦谷蛋白的主要组成部分(约占60%),在很大程度上决定着小麦的营养品质和加工品质。编码LMW-GS的基因位于小麦第一同源群1A、1B和1D染色体短臂末端,分别称为Glu-A3、Glu-B3和Glu-D3位点(统称Glu-3)。低分子量谷蛋白在遗传上受多基因控制,其基因位点在染色体上与醇溶蛋白紧密连锁,在蛋白质水平上与醇溶蛋白不易区分,在DNA序列上与醇溶蛋白基因具有一定的相似性。因此,研究的难度较大。为了进一步了解低分子量谷蛋白基因家族的成员和分布,本研究筛选四倍体小麦“Langdon”BAC文库,获得携带Glu-3的BAC克隆并对代表性BAC克隆进行全序列测序与分析,获得以下主要结果: 1.利用Southern杂交、SSR及Glu-A3和Glu-B3位点特异PCR标记方法筛选四倍体小麦“Langdon”BAC文库,获得了携带Glu-3基因的BAC克隆31个,通过Hind Ⅲ酶切图谱分析,初步构建了包含Glu-B3位点和Glu-A3位点的跨叠群,分别包含4个BAC克隆和8个BAC克隆。 2.对Glu-B3跨叠群中的BAC B9通过构建亚克隆文库,测序、组装拼接,获得了其全序列,长度139,403 bp。序列注释表明该BAC克隆除含有大量重复序列外,还含有1个LMW-GS基因,4个ω-gliadin基因,4个ω-gliadin基因小片段,2个未知蛋白和2个抗白粉病基因片段。Glu-B3与ω-gliadin的最近物理距离是56.4kb,这是国际上首次发现醇溶蛋白基因和低分子量谷蛋白基因的物理距离。 3.对Glu-A3跨叠群中的BAC D5通过构建亚克隆文库,测序、组装拼接,获得了其全序列,长度157,918 bp。序列分析表明该BAC克隆含有一个不编码的低分子量谷蛋白基因LMW-D5,1个脯氨酰基异构酶基因片段;1个葡萄糖转移酶片段,2个未知蛋白和8个贮藏蛋白片段。Glu-A3和γ-gliadin基因之间的最近的物理距离是65.9kb。与水稻全基因组序列Blast比对表明Glu-3基因所在的区域与水稻的相应区段不具有很好的共线性。 4.重复序列和基因的复制是造成小麦基因组庞大的一个重要原因。在BAC
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