普鲁兰酶属于脱支酶的一种,能够专一性的打断α-1,6-糖苷键,在淀粉加工工业中有广泛地应用。本研究从淀粉加工厂附近土壤中筛选得到一株普鲁兰酶高产菌株,初始酶活达到5.713 IU/mL。通过对此菌株的16S进行比对,以及生理生化鉴定,认定此菌株为klebiella variicola strain 7。通过发酵条件优化,确定最佳发酵产酶培养基玉米淀粉1.5%,蛋白胨2.0%,KH2PO40.05%,MgSO4.·7H2O 0.01%。装液量为70mL/250mL,发酵时间为48h,接种量为8%时酶活达到最高,此时普鲁兰酶的酶活高达67.8U/mL,比优化前普鲁兰酶的酶活提高了 11.87倍。将粗酶液由80%饱和度的硫酸铵盐析得到的粗普鲁兰酶,经SephadexG-25葡聚糖凝胶柱脱盐,SephadexG-100葡聚糖凝胶柱纯化后,得到电泳纯的普鲁兰酶,经SDS-PAGE检测后其相对分子量大约为120kDa,比活力达到51.15 U/mg,蛋白纯化了 4.15倍,酶的总回收率为26.9%。对纯化后的普鲁兰酶的酶学性质进行研究,其最适温度为45℃,最适缓冲液为醋酸钠缓冲液,最适pH值为5.6,在最适pH值下酶活性非常稳定;温度稳定性较好,在55℃保温120min后仍有80%酶活;终浓度为5mmol·L-1的Na+和Ca2+对酶活性有较强的促进作用,Co2+ Cu2+对该酶有较强的抑制作用。另外,该普鲁兰酶对普鲁兰糖的专一性最强。薄层层析法(TLC)对酶解产物进行的分析结果显示普鲁兰糖被生成了唯一的产物麦芽三糖,由此证明了该酶属于Ⅰ型普鲁兰酶。通过NCBI中报道的相似菌株的普鲁兰酶基因设计引物,成功的从该菌株中克隆出了普鲁兰酶基因。