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目的:通过冷冻干燥法制备负载生物活性因子SDF-1α、TGF-β1的丝素蛋白(silk fibroin,SF)/明胶海绵(gelatin sponge,GS)复合多孔支架,并对支架的理化性能进行表征及对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)成软骨分化能力的影响,为体内原位诱导软骨修复的动物实验打下基础及提供软骨损伤治疗新疗法的依据。方法:(1)制备支架的分组及组成为:(G0:单纯明胶海绵支架;GS:G0+2wt.%SF;(2)GST:G0+2wt.%SF+300ng/ml TGF-β1;GSS:G0+2wt.%SF+150ng/ml SDF-1α;GSTS:G0+2wt.%SF+150ng/ml SDF-1α+300ng/ml TGF-β1),使用扫描电镜(SEM)观察支架的形貌,使用傅里叶红外光谱仪(FTIR)测定支架的组成结构,并通过将支架浸泡在磷酸盐缓冲液(PBS)中检测支架的吸水率、降解性能、活性因子累计释放率。(2)支架对rBMSCs的影响:1.细胞相容性:将3-5代rBMSCs种植在支架上,培养1d后使用live-dead染色观察细胞活性;培养1、3、5d后,使用cck-8试剂测定细胞的增殖情况。2.细胞迁移性能:使用单层细胞划痕模型检测支架的对细胞的趋化能力3.使用qPCR和WB技术检测成软骨分化相关基因及蛋白的表达。结果:(1)SEM照片显示GS复合支架具有多孔结构,孔径约为127±15μm;FTIR结果显示各组支架的主要分子基团为蛋白酰胺键和氢氧键,没有其他物质的分子基团出现;GS符合支架吸水性能良好,但比G0支架吸水性低;GS复合支架降解率较G0显著降低;GS释放SDF-1α和TGF-β1的浓度明显比G0低,提示具有较长时间缓释活性因子的能力。(2)Livedead染色结果显示各组支架的细胞相容性良好,CCK8结果提示rBMSCs在支架上都能很好地增殖;单层细胞划痕模型提示负载两种因子的支架对细胞趋化作用最佳;qPCR显示负载因子的支架组都具有促进成软骨相关基因表达的能力;WB显示rBMSCs在负载TGF-β1的两组支架上表达的Sox9蛋白显著高于GS组,表明复合支架具有良好的成软骨分化性能。结论:成功制备了孔径适合软骨长入的丝素蛋白/明胶海绵多孔复合支架,GS复合支架具有良好的吸水性能、降解性能及活性因子缓释性能。体外细胞试验显示rBMSCs在支架都能很好的增殖,负载因子的GS支架具备募集rBMSCs的性能,并能诱导rBMSCs成软骨分化。本研究构建的负载SDF-1α和TGF-β1丝素蛋白-明胶海绵复合多孔支架符合原位诱导再生软骨组织工程材料的要求,并为进一步的体内软骨修复实验打下了良好的基础。