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白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病,髓系白血病是白血病的一类,包括急性和慢性两种,占白血病总发病率的63%以上。髓系白血病发病率高,病情发展迅猛,而目前临床髓系白血病药物存在毒副作用大、治愈率低等缺点。因此亟需开发髓系白血病新的治疗靶点和药物。SR48968是神经激肽受体2(NK2R)的一种高选择性和特异性拮抗剂,目前尚未见关于NK2R参与髓系白血病发生发展的相关文献报道。本论文以髓系白血病为模型,重点研究了 NK2R拮抗剂SR48968对髓系白血病增殖的作用及其潜在分子机制。研究结果显示髓系白血病患者外周血白细胞和髓系白血病细胞系中NK2R呈显著高表达,低浓度的SR48968能促进K562、HL60细胞的增殖,而高浓度的SR48968能抑制K562、HL60细胞增殖,且阻滞细胞周期于Go/G1期,并剂量和时间依赖地诱发细胞坏死。SR48968处理K562、HL60细胞剂量依赖地引起LDH释放和PI吸收增加。坏死抑制剂Nec-1能显著缓解SR48968对K562、HL60细胞增殖的抑制作用,这说明SR48968引起的坏死是受程序性调控的。另外,在钙流实验中我们观察到随着SR48968药物浓度的增加,胞质和线粒体钙流明显增加。在SR48968作用下,胞质和线粒体的活性氧均增加,而胞质Ca2+螯合剂和线粒体Ca2+抑制剂又能降低SR48968引起的胞质和线粒体活性氧,提示胞质和线粒体Ca2+的增加引起了 ROS的增加;内质网钙通道阻滞剂对ROS的产生无影响,而无钙培养基清除细胞外Ca2+后也能降低ROS的产生,提示SR48968引起K562细胞胞外Ca2+内流,引起胞质和线粒体Ca2+的增加,进而促进了胞质和线粒体ROS的增加。细胞增殖活力的结果表明,SR48968对K562、HL60细胞造成的细胞增殖抑制作用能被胞质Ca2+螯合剂和线粒体Ca2+抑制剂及活性氧清除剂缓解,提示钙升高引起的ROS增加介导了 SR48968引起的K562细胞坏死。免疫印迹结果显示,SR48968处理K562细胞后,引起坏死相关蛋白RIP1、RIP3和MLKL磷酸化程度增加。定量蛋白质组学和转录组学结果显示SR48968阻断NK2R引起K562细胞中凋亡、周期相关蛋白呈现差异表达。总之,本研究论文发现高剂量NK2R拮抗剂SR48968能剂量依赖地抑制髓系白血病细胞增殖,并阐明了其全新的分子机制,为开发NK2R为髓系白血病治疗新靶点提供了基础理论依据,为白血病患者的临床治疗带来新的希望和突破。