论文部分内容阅读
目的:探究P2X4信号轴对6-羟基多巴胺(6-OHDA)成功诱导的帕金森病雄性大鼠模型黑质中铁代谢的影响。方法:将120只雄性大鼠随机分为对照组、6-OHDA组(帕金森病组)、携带P2X4基因病毒(P2X4-Positive Intervention,P2X4-PI)组、P2X4基因空载病毒(P2X4-Negative Control,P2X4-NC)组、P2X4-PI+6-OHDA组以及P2X4-NC+6-OHDA组,共6组,每组20只。应用脑立体定位仪定位,通过微量注射器分别将含有抗坏血酸的生理盐水、6-OHDA、携带P2X4基因病毒、空载病毒相应药品注射于大鼠左侧黑质,诱导形成:对照组、帕金森病组、P2X4-PI组和P2X4-NC组;P2X4-PI+6-OHDA组和P2X4-NC+6-OHDA组先分别于大鼠左侧黑质注射P2X4基因病毒、空载病毒,2周后再向左侧黑质注射6-OHDA。为筛选出合格大鼠的模型,在造模制备完成2周后可进行行为学试验,并进一步通过平衡杆实验评价各组大鼠的始动性及平衡能力。将造模完成4周后且合格的大鼠模型断头取脑,留取脑组织,进行相关处理后保存备用。通过采用免疫荧光染色法、Western blot法分别检测6组大鼠左侧黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性多巴胺能神经元数量的变化以及P2X4嘌呤受体(P2X4R)、二价金属离子转运体1(DMT1)和膜铁转运蛋白1(FPN1)的蛋白表达水平。结果:1.免疫荧光染色结果显示:与对照组(7942.0±461.6)相比,帕金森病组(4724.0±261.1,t=13.17,P<0.01)和P2X4-NC+6-OHDA组(4470.0±228.9,t=14.21,P<0.001)黑质里面的TH多巴胺能神经元数量呈现出减少的变化,同时存在有统计学意义;与P2X4-NC+6-OHDA组相比,P2X4-PI+6-OHDA组(2493.0±371.6,t=8.092,P<0.01)大鼠TH多巴胺能神经元数量也呈现出减少的趋势,亦存在统计学意义;然而,与对照组相比,P2X4-PI组(7878.0±356.7)和P2X4-NC组(7785.0±342.6)大鼠左侧黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量变化不大。2.Western blot结果显示:与对照组(1.723±0.146、1.369±0.107、1.02±0.059)相比,帕金森病组(2.107±0.070,t=4.368,P<0.05;1.733±0.117,t=4.245,P<0.05;0.783±0.042,t=5.795,P<0.01)和P2X4-NC+6-OHDA组(2.104±0.110;1.737±0.073;0.804±0.037;均P<0.05)大鼠左侧黑质中P2X4R、DMT1蛋白表达水平上升,FPN1蛋白下降,并且存在统计学意义;与P2X4-NC+6-OHDA组相比,P2X4-PI+6-OHDA组(2.875±0.170,t=8.770;2.845±0.180,t=12.92;0.550±0.040,t=6.216;均P<0.01)大鼠左侧黑质中P2X4R、DMT1、FPN1蛋白表达水平变化同上;与对照组相比,P2X4-PI组(2.099±0.108、1.367±0.084、0.985±0.006)和P2X4-NC组(1.675±0.119、1.316±0.136、1.007±0.089)大鼠左侧黑质中DMT1、FPN1蛋白表达水平相仿,结果无显著差异。结论:P2X4基因过表达可使大鼠中脑黑质中的DMT1表达上调,FPN1表达下调,从而导致中脑黑质中铁元素沉积,这可能对多巴胺能神经元造成损伤,最终对帕金森病潜在的发生和发展产生影响。