Leptin是ob基因的表达产物，是由脂肪细胞分泌的一种16kDa的蛋白，与动物的采食量、能量代谢、繁殖与生产性能的调控有密切关系，目前国外已初步应用于人和啮齿类动物摄食与能量平衡的调控。但是对猪的研究才刚刚起步，因此，在体外进行其克隆表达为进一步研究leptin在改善动物繁殖性能、肉品品质和治疗人类肥胖症方面的应用奠定了基础。本研究利用基因工程原理及现代分子生物学实验技术研究了如下内容： 1．三江白猪ob基因的克隆与序列分析从健康三江白猪的皮下脂肪组织中提取总RNA，根据文献报道的猪ob基因序列设计引物，采用RT-PCR方法扩增出ob基因。并将所获得的目的基因插入pMD18-T克隆载体，构建克隆质粒pMD18-T-ob，然后经双酶切、PCR鉴定，将鉴定正确的质粒进行序列测定，基因序列分析表明与GenBank中猪ob基因的编码序列一致为441bp，说明所克隆的基因正确。 2．三江白猪ob基因在大肠杆菌中的表达及其多克隆抗体的制备在获得三江白猪ob基因重组质粒pMD18-T-ob的基础上，成功地构建了原核表达质粒pET-28a-ob；然后将表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，使用IPTG诱导目的蛋白表达。SDS-PAGE检测结果显示，三江白猪ob基因在大肠杆菌中得到了正确表达。将初步纯化的表达产物作为抗原免疫小白鼠，制每三江白猪ob基因的多克隆抗体。同时对表达产物进行复性。应用ELISA检测到较高的多克隆抗体效价(1：25600)，表明此蛋白具有良好的免疫原性。Western-blot结果显示；利用纯化包涵体制备的鼠抗血清可以很好地和所表达的蛋白带特异性结合。 3．原核表达leptin复性后对小白鼠繁殖性能及脂肪调控的研究利用小白鼠体内实验检测复性后leptin的生物学活性。结果表明，复性后的leptin可使小白鼠的采食量、体重显著降低；使小白鼠的初情期提前约6.1天；血清游离脂肪酸、甘油三酯含量也显著下降。体内实验结果说明，我们所表达的leptin经复性后具有较好的生物学活性。 本实验获得了具有较好生物学活性的重组leptin，为进一步研究在改善动物繁殖性能、肉品品质和治疗人类肥胖症方面的应用奠定了基础。