随着基因组时代的到来，多种生物的基因组已经测序完成。如果能够精确地操作每一个基因，那么我们将有可能破解基因组图谱中每一个符号所传递的讯息。粗糙脉孢菌、构巢曲霉、黑曲霉等丝状真菌的基因组测序也已经完成。在丝状真菌的转化过程中，外源DNA往往随机整合在染色体中，同源重组发生频率很低，在黑曲霉中仅有3-5％。Ku70是参予NHEJ(nonhomologousend-joining)的关键蛋白之一，有研究报道，阻断粗糙脉孢菌的ku70基因后，同源重组频率大大提高，甚至可以达到100％，本论文研究阻断黑曲霉的ku70基因对其同源重组频率的影响。本研究首先通过序列比对，在黑曲霉基因组中，得到了可能的黑曲霉ku70基因序列，构建了黑曲霉ku70基因阻断质粒pBS-ku70A，通过原生质体-PEG介导的方法，转化黑曲霉GICC2773菌株，得到ku70基因阻断菌株△ku70。分别以△ku70菌株和黑曲霉GICC2773菌株作为受体，阻断甘露糖转移酶基因mnn9，比较同源重组的发生频率。结果表明：以△ku70菌株为受体，48株转化子得到2株mnn9同源重组菌株；以GICC2773为受体，结果相同。根据我们现有的实验，黑曲霉ku70基因的阻断，没有显示同源重组频率的提高。 Ku80也是参予NHEJ的关键蛋白之一，采用同样的方法，得到可能的黑曲霉ku80基因序列，构建了阻断质粒pBS-ku80H，得到突变菌株△ku80。以其作为受体，阻断蛋白酶基因pepAb，所得30株转化子中有1株为pepAb同源重组菌株，这说明黑曲霉ku80基因的阻断也没有提高同源重组频率。 另外，本文还构建了两个蛋白酶基因阻断质粒，分别是pBS-pepAbA和pUCm-pepBA。