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背景和目的:高泌乳素血症（Hyperprolactinemia,HPRL）是指由各种原因导致的血清泌乳素（Prolactin,PRL）异常升高（大于1.14 nmol/L或25μg/L）的一类内分泌疾病,其主要的临床表现为溢乳、月经稀发、闭经以及内分泌功能紊乱。但有关高泌乳素血症导致的生殖内分泌紊乱的作用途径及机理还不十分清楚。已有研究提示,PRL可通过作用于促性腺激素释放激素（Gonadotropin-releasing Hormone,GnRH）神经元,抑制GnRH释放,导致FSH和LH分泌减少,从而抑制雌二醇和孕酮分泌。然而,现有研究显示,仅少量泌乳素受体表达于GnRH神经细胞,而大部分泌乳素受体表达于kisspeptin神经元以及卵巢、睾丸等外周组织。另外,我们前期研究显示,Kiss1/GPR54系统也表达于卵巢黄体组织,并参与卵巢黄体内分泌功能的调节,这提示HPRL可能通过Kiss1/GPR54系统来影响卵巢黄体的内分泌功能。故本研究拟通过腹腔注射盐酸甲氧氯普胺（Metoclopramide,MC）诱导HPRL模型和离体黄体细胞培养,来观察HPRL是否通过外周卵巢Kiss1/GPR54系统影响大鼠卵巢黄体的内分泌功能以及其相关的作用机制。方法:1、通过间接免疫荧光染色法观察Kiss1与PRLR蛋白在正常大鼠卵巢黄体组织及细胞中的表达及相互关系。2、构建在体HPRL模型,观察HPRL对大鼠卵巢黄体组织结构及其内分泌功能的影响。3、采用免疫组织化学和实时定量PCR技术观察HPRL对大鼠卵巢组织Kiss1和GPR54表达水平的影响。4、运用离体细胞培养技术和放射免疫方法观察kisspeptin与PRL对hCG诱导的大鼠卵巢黄体细胞雌二醇与孕酮分泌的影响。5、采用实时定量PCR技术观察kisspeptin与PRL对hCG诱导的大鼠卵巢黄体细胞类固醇激素合成关键酶mRNA表达水平的影响。6、运用酶联免疫分析法观察kisspeptin与PRL对hCG诱导的大鼠卵巢黄体细胞PGF2α和PGE2分泌的影响。7、采用免疫印迹技术观察kisspeptin与PRL对hCG诱导的大鼠卵巢黄体细胞Erk1/2磷酸化的影响。结果:1、间接免疫荧光染色结果表明:未成年大鼠卵巢组织黄体化后,Kiss1蛋白和PRLR蛋白共表达于卵巢黄体组织细胞。2、HE染色结果显示,与对照组相比,HPRL对大鼠卵巢重量、黄体的数量及其面积没有明显的影响（P>0.05）。然而,放射免疫结果显示HPRL大鼠血清雌二醇和孕酮水平明显下降（P<0.01）。3、与对照组相比,免疫组织化学结果显示,HPRL大鼠卵巢黄体组织Kiss1蛋白表达水平明显下降,GPR54蛋白表达水平也明显下降;实时定量PCR结果表明,HPRL大鼠卵巢黄体细胞Kiss1以及GPR54 mRNA表达水平也显著下降（P<0.01）。4、在离体黄体细胞培养中,与对照组相比,高浓度PRL对大鼠黄体细胞雌二醇与孕酮分泌具有显著的抑制作用（P<0.01）;相比PRL组,黄体细胞液中加入PRL+kisspeptin-10能显著增加孕酮的分泌水平（P<0.01）,而雌二醇的分泌量没有明显变化（P>0.05）。5、在离体黄体细胞培养中,与对照组相比,高浓度PRL对hCG诱导的大鼠黄体细胞类固醇激素合成几个关键酶（St AR,3β-HSD,CYP11A）mRNA表达水平均具有明显的抑制作用（P<0.05）;相比PRL组,黄体细胞液中加入PRL+kisspeptin-10能显著增加几个关键酶mRNA水平的表达（P<0.05）。6、酶联免疫分析结果显示,与对照组相比,高浓度PRL明显可增加hCG诱导的大鼠黄体细胞PGF2α分泌水平（P<0.01）,而kisspeptin-10可明显降低其对黄体细胞PGF2α水平的促进作用（P<0.01）;并且,高浓度PRL可明显抑制hCG诱导的大鼠黄体细胞PGE2的分泌（P<0.01）,kisspeptin-10可明显改善其对黄体细胞PGE2分泌水平的抑制作用（P<0.05）。7、免疫印迹检测结果显示,与对照组相比,高浓度PRL明显可减少Erk1/2的磷酸化;相比PRL组,黄体细胞液中加入PRL+kisspeptin-10能显著增加Erk1/2的磷酸化。结论:HPRL可明显抑制大鼠卵巢黄体细胞的内分泌功能,这种效应可能部分通过下调卵巢黄体组织Kiss1/GPR54的表达实现。