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背景乳腺癌（Breast carcinoma），是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率逐年升高，严重威胁女性的健康。乳腺癌复发率高，且晚期转移性乳腺癌并发症重、死亡率高，治愈极为困难。因此，针对乳腺癌的发生发展机制以及抗乳腺癌治疗药物的研究受到人们极大的关注。乳腺癌干细胞被认为是许多乳腺癌患者复发及转移的“元凶”，并影响乳腺癌患者的生存及预后。影响乳腺癌干细胞特性的因素有很多。近年来，国内外许多研究发现，肿瘤微环境可调控肿瘤的发生、增殖及转移等多种生物学行为。其中，肿瘤微环境中的成纤维细胞，即肿瘤相关成纤维细胞（Tumor associated fibroblasts，TAFs），被认为在肿瘤-间质相互作用以及包括乳腺癌在内的众多恶性肿瘤的发生[1]、增殖[2]、转移[3,4]、上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）[5]、血管生成[6]、肿瘤干细胞[7,8]以及治疗耐受[9]等复杂过程中发挥着重要作用。然而大部分机制还不明确。多项研究提出miRNA可能与细胞的多分化潜能相关，Tarantino C等也提出mir-100可能调控胚胎干细胞的分化能力[10]。研究和探讨miRNA与肿瘤干细胞的联系可能为肿瘤的临床治疗提供新的方法。目的1、本课题以课题组前期的研究为基础，拟通过临床乳腺癌患者手术标本中分离培养的肿瘤相关成纤维细胞与乳腺癌细胞系之间的相互作用，观察其对乳腺癌干细胞特性的影响，并在临床病例中检测肿瘤相关成纤维细胞及乳腺癌干细胞的特征性标志物，从而探讨及研究肿瘤相关成纤维细胞对乳腺癌干细胞的作用及对乳腺癌患者临床预后的影响，为乳腺癌的诊断及治疗寻求新的方向及依据。2、在临床病例中检测mir-100及乳腺癌干细胞的特征性标志物，从而探讨及研究mir-100对乳腺癌干细胞的作用及对乳腺癌患者临床预后的影响，为乳腺癌的治疗寻求新的方向及依据。实验材料和方法1、细胞及组织切片来源人类乳腺癌细胞系MCF-7与BT474由中山大学孙逸仙纪念医院宋尔卫课题组提供。人类原代乳腺癌成纤维细胞、癌旁成纤维细胞以及正常乳腺成纤维细胞自中山大学孙逸仙纪念医院乳腺外科住院患者手术标本中分离培养而来。182例乳腺癌临床标本石蜡切片及36例正常乳腺及乳腺良性疾病手术标本石蜡切片来自中山大学孙逸仙纪念医院乳腺外科住院患者手术标本石蜡切片。2、实验方法（1）免疫细胞化学（免疫荧光）及Western blot鉴定分离培养的原代成纤维细胞（2）Transwell模型进行原代成纤维细胞与乳腺癌细胞系的共培养（3）无血清球囊培养基培养乳腺癌干细胞（4）流式细胞检测各组乳腺癌细胞的CD44high/CD24low细胞比例（5）有限稀释法进行球囊培养及比较各组乳腺癌细胞的球囊形成能力（6）western blot检测各组乳腺癌细胞ALDH1的表达（7）流式细胞检测各组乳腺癌细胞的ALDH1+细胞比例（8）免疫组织化学法检测临床乳腺癌患者α-SMA、ALDH1的表达（9）显色原位杂交法检测临床乳腺癌患者mir-100的表达3、统计分析（1）计量资料的描述采用均数±标准差（X±S）表示。多组计量资料的比较采用单因素方差分析；组间两两比较采用LSD检验。（2）计数资料的描述采用百分比（%）表示。两组或多组计数资料的比较采用χ2检验、Fisher精确概率法分析。（3）两组表达之间的相关性用Spearman等级相关检验。（4）寿命表法计算5年生存率；Kaplan-Meier法绘制生存曲线，组间差异的比较采用log-rank检验；多因素Cox回归模型进行预后的多因素分析。（5）所有数据均采用SPSS13.0统计软件处理，检验水准P＜0.05时差异具有统计学意义。结果1、原代乳腺成纤维细胞的分离、培养及鉴定。通过原代分离培养得到的肿瘤相关成纤维细胞α-SMA、vimentin阳性，并排除肿瘤细胞污染（CK阴性）。2、CAF促进乳腺癌CD44high/CD24low细胞比例升高3、CAF可从数量及大小两方面促进乳腺癌细胞球囊形成4、CAF促进乳腺癌细胞ALDH1的表达略升高5、CAF促进乳腺癌细胞ALDH1+细胞比例升高6、临床乳腺癌标本α-SMA高表达的患者干细胞标志物ALDH1的表达升高7、临床乳腺癌标本中ALDH1高表达者mir-100的表达下调结论1、肿瘤相关成纤维细胞可能参与调控乳腺癌干细胞特性的形成或维持。2、临床乳腺癌病例中α-SMA与ALDH1的表达具有正相关关系，肿瘤相关成纤维细胞在肿瘤体积增长的过程中起支持作用。α-SMA和ALDH1的表达水平与乳腺癌患者的临床预后负相关。3、临床乳腺癌病例中mir-100与ALDH1的表达呈负相关，mir-100的下调可能与乳腺癌干细胞相关，并且mir-100的表达水平与乳腺癌患者的临床预后正相关。