Cyr61因子在骨肉瘤细胞中的表达和临床意义

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目的:骨肉瘤是骨的原发恶性肿瘤,在原发骨肿瘤中的发病率居第二位,约占30%仅次于浆细胞骨髓瘤。骨肉瘤的预后极差,虽然新铺助化疗的应用已使就诊时无肺转移的骨肉瘤患者5年生存率由原来的20%提高到了现在的70%,但对于就诊时已经出现肺转移的骨肉瘤患者,其5年生存率仍然低于20%。对于肺转移病灶的清除或控制,目前化疗药物然效果仍较差。单一的肺部转移病灶可以用手术的方式去除,但对于多发的病灶就只能依靠于药物了。因此对于如何能早期诊断出骨肉瘤,尤其是对有肺转移的骨肉瘤能获得早期诊断已成为我们提高骨肉瘤患者生存率的一个瓶颈。对骨肉瘤肺转移相关基因的研究成为现在研究的一个热点,因为这些基因可以对骨肉瘤早期肺转移的诊断提供一个预测指标,并且可能成为后期化疗药物治疗的一个新靶点。能明显提高骨肉瘤患者的生存率,因此有着非常重要的临床意义。本实验通过免疫组化的方法对骨肉瘤标本中Cyr61进行检测,来比较和探讨Cyr61在骨肉瘤患者中的表达及临床意义。材料与方法:选取2008年7月份到2012年1月份河北医科大学第三医院骨病科收治的42例骨肉瘤患者手术标本石蜡包埋块,其中有19例骨肉瘤患者早期发生了肺转移,按照骨肿瘤的Enneking临床分期进行分组,Ⅱ期22例,Ⅲ期20例,另外选取骨纤维结构不良手术标本石蜡包埋块18例,Cyr61兔抗人多克隆抗体(bs-1290;PV二步法免疫组化检测试剂盒(PV-6001),步骤:1、脱蜡、水化组织切片,2、根据Cyr61抗体的特殊要求,行预处理组织。3、3%甲醇H202水孵育20分钟,切断内源性过氧化物酶,PBS冲洗,2分钟x3次4、滴加一抗,4°冰箱过夜PBS冲洗,2分钟x3次5、滴加PV-6001兔IgG抗体-HRP多聚体,37度温室孵育30分钟PBS液冲洗,2分钟X3次。6、DAB染色,7、蒸馏水泡2次8、复染、脱水、透明9、封片。采用PV二步免疫组化方法检测骨肉瘤及骨纤维结构不良组织标本中Cyr61蛋白的表达,设定已知的阳性结果作为阳性对照,阴性对照中一抗采用PBS缓冲液代替的方法。判断标准:将骨肉瘤患者标本的染色结果与骨纤维结构不良标本染色结果进行对比,骨肉瘤患者中的肺转移与未转移的结果再进行比较。采用双评分结果相乘的方法进行评分:(1)染色强度评分:无色为0分,淡棕黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。(2)靶细胞阳性百分比评分:阳性细胞的百分比<10%为1分,11%-50%为2分,50%-75%为3分,>75%为4分。两个评分相乘≥3为阳性,阳性结果的判断中我们应该注意几个问题:(1)、切片背景清晰且与染色结果间对比度要好,(2)阳性细胞的定位准确,出血坏死及受挤压细胞组织以及炎性细胞不应作为判断的依据。这种评分兼顾了阳性的强度和数量。所得数据使用统计软件spss17.0进行统计处理。结果:Cyr61在骨肉瘤组织和骨纤维结构不良组织中均有表达,在42例骨肉瘤组织中阳性率为88.09%(37/42),肺转移组织阳性百分率89.47%(17/19),未转移组织阳性百分率为86.96%(20/23)。在18例的骨纤维结构不良组织中的阳性表达率38.89%(7/18).其中在骨肉瘤组织中的阳性表达率88.09%(37/42)与在骨纤维结构不良组织中的阳性表达率38.89%(7/18)相比较,在统计学上有明显差异,有统计学意义(P<0.05),其中发生肺转移的骨肉瘤与未发生肺转移的阳性表达结果相比较,两组表达在统计学上无明显差异,无统计学意义(P>0.05)按Enneking分期,Ⅱ期22例,其中阳性表达率86.36%(19/22),Ⅲ期20例,其中阳性率90.00%(18/20),在表达率上两组间无明显的统计学差异,无统计学意义(P>0.05)。并且按患者的年龄,性别,以及碱性磷酸酶(ALP)进行分组,组别间的表达无统计学意义(P>0.05)。结论:通过对40例骨肉瘤及18例骨纤维结构不良组织标本中的Cyr61表达的检测,并对其结果进行研究分析,我们得出结论为:1、 Cyr61在骨肉瘤细胞中有明显高表达。2、 Cyr61的高表达可能促进了骨肉瘤的发生。3、 Cyr61表达高低与骨肉瘤的远处转移无明显的相关性。
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