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抑郁症(depression)是指以心境显著而持久的低落为基本临床表现,并伴有相应的思维和行为改变的一类心境障碍疾病,有反复发作的倾向。在中医辨证中可归于“虚劳病”范畴,中医强调“阳主动”,阳气主导神志、情绪、思维等,而肾阳在身之阳气中具有重要作用,与抑郁症的发病关系密切。肾阳虚抑郁症的发病机制尚不完全明确,现已知,大量外源性糖皮质激素可以诱发肾阳虚抑郁症从而导致机体神经内分泌紊乱,生理、生化及相关基因蛋白表达也发生变化。因此,肾阳虚抑郁症可能引起机体肝脏CYP450酶的活性发生变化,从而导致抗抑郁药物的疗效差异。本研究通过注射氢化可的松建立肾阳虚抑郁大鼠模型,探讨肾阳虚抑郁状态大鼠CYP450酶的活性变化,并采用温振肾阳法,给予中药经典方剂四逆汤,进一步观察四逆汤对抑郁状态下活性改变的CYP450酶的调节作用,为临床用药提供参考。建立了用于评价四逆汤配方颗粒的质量及进行不同时长的煎煮对6种主要成分含量变化影响的高效液相色谱方法。结果显示,不同时长的煎煮对四逆汤配方颗粒中甘草苷等6种成分含量具有一定的影响,煎煮60 min,甘草苷、甘草酸、苯甲酰次乌头碱、6-姜酚和6-姜烯酚的含量较高,且新乌头碱的含量较低。采用液质联用法分析大鼠血浆中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)及多巴胺(DA),观察肾阳虚抑郁大鼠血浆中5-HT、NE及DA的含量变化,及四逆汤干预对其影响。64只雄性SD大鼠,分为8组:空白1组、模型1组、自愈组、空白2组、模型2组、氟西汀组、四逆汤中剂量组、四逆汤高剂量组。对照组每天给予一定体积的生理盐水,其余各组每天给予造模药物氢化可的松,造模结束后,进行行为学测试及生物样本采集;第22天开始,给予相应实验药物进行干预14天,治疗结束后进行眼眶取血。行为学测试结果显示,模型大鼠在体重、旷敞试验、强迫游泳实验、糖水偏好实验的测试中均具有明显的肾阳虚抑郁表现;生化指标检测结果显示,模型大鼠的某些脏器指数显著降低,如肾脏、胸腺、睾丸及附睾指数显著降低(P<0.05),脾脏指数极显著降低(P<0.01),单胺类神经递质紊乱,如5-HT、NE的含量显著或极显著升高(P<0.05,P<0.01),14天后模型大鼠血浆中5-HT、NE、DA含量均有所降低,并且5-HT、DA的含量显著或极显著低于空白组,而经药物治疗后的肾阳虚抑郁大鼠血浆中紊乱的单胺类神经递质水平得到不同程度的纠正。与未经药物干预的模型大鼠比较,结果显示氟西汀显著或极显著增加模型大鼠血浆中5-HT、NE的含量,中剂量四逆汤显著或极显著增加血浆中5-HT、NE及DA的含量,高剂量四逆汤极显著增加血浆中5-HT与DA的含量,显著降低NE的含量。结果表明,氢化可的松诱导肾阳虚抑郁大鼠造模成功,四逆汤对肾阳虚抑郁症具有一定的改善作用,表现出一定的抗抑郁效果。采用探针药物法研究肾阳虚抑郁大鼠体内CYP450酶的活性变化,及四逆汤的调节效果。建立肾阳虚抑郁模型,以茶碱、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲、右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑作为探针,考察 CYP1A2、CYP2E1、CYP2C6、CYP2D2、CYP2D1 及 CYP3A2 的活性。7组雄性SD大鼠,包括:空白1组、模型1组,空白2组、模型2组、氟西汀组、四逆汤中剂量组、四逆汤高剂量组,21天造模结束后,空白1组、模型1组灌胃6种探针药物,按预先设计的时间点取血,采用液质联用仪测各探针血药浓度,计算药动学参数。结果显示,与空白1组相比,模型大鼠体内3种探针代谢显著加快(P<0.01),分别为:茶碱、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲,而右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑的代谢无显著差异,结果表明,肾阳虚抑郁模型大鼠CYP2E1、CYP1A2、CYP2C9被诱导。于第22天开始,给予相应实验药物进行干预14天,于第36天给予探针混合药物茶碱、氯唑沙宗及甲苯磺丁脲,运用液质联用仪分析各组大鼠体内3种探针血药浓度,计算药动学参数并进行组间比较。结果显示,与模型2组比较,各治疗组大鼠血中CYP1A2、CYP2E1、CYP2C6的酶活性逐渐向正常回归,表明四逆汤及氟西汀对肾阳虚抑郁大鼠体内CYP1A2、CYP2E1、CYP2C6的酶活性具有一定的调节作用。采用LC-MS/MS法测定大鼠血浆中牛磺酸(Tau)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、犬尿氨酸(Kyn)、犬尿喹啉酸(KA)及丙氨酸(Ala)的含量,观察肾阳虚抑郁大鼠血浆中Tau、Glu、Gly、Kyn、KA及Ala的变化情况,及四逆汤干预对其影响。雄性SD大鼠48只,分为空白2组、模型2组、自愈组、氟西汀组、四逆汤中、高剂量组,采用氢化可的松建立肾阳虚抑郁模型,造模结束后,给予相应实验药物进行干预14天,治疗结束后眼眶取血。结果显示,氢化可的松诱导大鼠21天后,与空白2组相比,模型2组大鼠血浆中Ala、Glu、Gly含量以及Kyn/KA的比值均显著下降;与模型2组相比,自愈组大鼠血浆中Ala、Glu、Gly含量继续下降,Kyn/KA比值显著升高;经过连续14天的抗抑郁西药氟西汀或中、高剂量的四逆汤干预后,与模型2组相比,中、高剂量的四逆汤均能显著或极显著提高血浆中Ala、Glu、Gly的含量,高剂量的四逆汤能显著升高血浆中Kyn/KA的比值,高剂量四逆汤能够显著增加血浆中Tau的含量,氟西汀能增加或显著增加血浆中Ala、Glu、Gly含量,然而却降低Kyn/KA的值。结果表明,肾阳虚抑郁症模型大鼠血浆中Glu、Gly、Ala、Kyn、KA的含量异常,抗抑郁西药氟西汀及中医经典方剂四逆汤均可有效调节5种氨基酸类神经递质的含量,并向正常水平回归。推测氟西汀及四逆汤的抗抑郁机制可能涉及对氨基酸类神经递质代谢的调节作用。采用免疫印迹法考察肾阳虚抑郁模型大鼠的海马和前额叶中脑源性神经营养因子(BDNF)的蛋白表达,以及给予四逆汤后,观察其对BDNF蛋白表达的影响。40只雄性SD大鼠,分为5组,包括:空白2组、模型2组、氟西汀组、四逆汤中、高剂量组,进行造模,持续21天;于第22天开始,给予相应实验药物进行干预14天,治疗结束后取海马及前额叶。结果显示,与空白2组相比,模型大鼠的海马及前额叶中的BDNF表达均显著降低(P<0.05),抗抑郁西药氟西汀及中、高剂量的四逆汤均能不同程度的提高海马及前额叶中BDNF的表达。推测氟西汀及四逆汤可能通过改善抑郁症BDNF的表达,起到保护神经系统的作用。