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目的化疗是白血病治疗的基本手段,能够抑制白血病的进展,提高患者的生存率和生活质量。但大多数肿瘤细胞在化疗之后,对抗肿瘤药物产生耐药性,导致化疗失败或肿瘤复发。多药耐药(MDR)指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性的同时,对结构和作用机制完全不同的其他抗肿瘤药物产生交叉耐药性的现象[1]。MDR是导致肿瘤化疗失败或肿瘤复发的重要原因之一,目前克服多药耐药仍然是一个较大的挑战。多数情况下应用一种逆转剂效果欠佳,应用剂量大时增强毒副作用,限制了临床的应用。目前已有研究表明[14,15,21,22]环孢素A和三氧化二砷单独应用对多药耐药有一定的逆转作用,但两药联合应用未见报道。本研究采用WST-1法测定环孢素A和三氧化二砷对具有多药耐药表型的人白血病细胞株K562/ADM细胞的非细胞毒性剂量,联合两药作用于K562/ADM细胞,观察逆转耐药的疗效,并应用RT-PCR法检测MDR1mRNA、hMLH1mRNA的表达量,及免疫组化法检测P-gp、hMLH1蛋白的表达量,探讨其逆转机制,为其以后临床应用提供相关的实验室数据,同时为难治、复发肿瘤的治疗提供新的治疗思路。方法1.水溶性四唑盐光吸收(WST-1)法检测环孢素A和(或)三氧化二砷对K562细胞、K562/ADM细胞的毒性及其作用后的逆转耐药倍数。2. RT-PCR法检测各组MDR1mRNA、hMLH1mRNA的表达：(1)K562细胞组,(2)K562/ADM细胞组, (3)非细胞毒性剂量环孢素A及三氧化二砷联合作用于K562/ADM细胞组(K562/ADM+CSA非细胞毒性剂量+As2O3非细胞毒性剂量)。3.免疫组化法检测各组P-gp、hMLH1蛋白的表达：(1)K562细胞组,(2)K562/ADM细胞组,(3)非细胞毒性剂量环孢素A及三氧化二砷联合作用于K562/ADM细胞组(K562/ADM+CSA非细胞毒性剂量+As2O3非细胞毒性剂量)4.统计分析：所得结果应用SPSS11.5统计学软件处理,统计学数据用均数±标准差(x±s)表示。两组均数的比较采用t检验分析,多样本均数的比较在方差齐性检验后采用单因素方差分析。以α=0.05为检验水准,P<0.05为差异有显著性。结果1.WST-1结果显示：(1)ADM IC50值在K562细胞、K562/ADM细胞分别是1.06±0.019μm1.32.47±0.012μml,统计学分析后有显著性差异(P<0.05),K562/ADM细胞的耐药倍数为30.63。CSA IC50值在K562细胞、K562/ADM细胞分别是0.357±0.018μg/m1、0.372±O.016μg/m1,统计学分析后无显著性差异(P>0.05),K562/ADM细胞的耐药倍数为1.04.As203IC50值在K562细胞、K562/ADM细胞分别是0.733±0.142μg/m1.0.923±0.232μg/m1,统计学分析后无显著性差异(P>0.05),K562/ADM细胞的耐药倍数为1.26。(2)非细胞毒性剂量的CSA(0.0005μg/m1)和As2O3(0.002μg/m1)单独应用,ADM对K562/ADM细胞的IC50分别降至20.52±2.34μg/m1和21.62±1.81μg/m1,逆转倍数分别为1.58倍和1.50倍。非细胞毒性剂量的CSA与As2O3联合作用于K562/ADM细胞,IC50降至9.63±1.57μg/m1,逆转倍数为3.37倍。2.RT-PCR扩增结果显示：(1)K562细胞组与K562/ADM细胞组比较,MDR-1mRNA的表达减少,差异有显著性(P<0.05).K562/ADM+ CSA非细胞毒性剂量+As2O3非细胞毒性剂量组与K562/ADM细胞组比较,MDR-1 mRNA的表达下调,差异有显著性(P<0.05),K562细胞组与K562/ADM+ CSA非细胞毒性剂量+As2O3非细胞毒性剂量组比较差异无显著性(P>0.05)。(2)K562细胞组与K562/ADM细胞组比较,hMLH1 mRNA的表达增多,差异有显著性(P<0.05).K562/ADM+CSA非细胞毒性剂量+As2O3非细胞毒性剂量组与K562/ADM细胞组比较,hMLH1 mRNA的表达上调,差异有显著性(P<0.05),K562细胞组与K562/ADM+ CSA非细胞毒性剂量+As2O3非细胞毒性剂量组比较差异无显著性(P>0.05)。3.免疫组化法染色法检测结果显示：1)K562细胞组与K562/ADM细胞组比较,P-gp表达减少,差异有显著性(P<0.05),K562/ADM+ CSA非细胞毒性剂量+As203非细胞毒性剂量组与K562/ADM细胞组比较,P-gp表达下调,差异有显著性(P<0.05),K562细胞组与K562/ADM+ CSA非细胞毒性剂量+As203非细胞毒性剂量组比较差异无显著性(P＞0.05)。(2)K562细胞组与K562/ADM细胞组比较,hMLH1蛋白表达增多,差异有显著性(P<0.05),K562/ADM+ CSA非细胞毒性剂量+As203非细胞毒性剂量组与K562/ADM细胞组比较,hMLH1蛋白表达上调,差异有显著性(P<0.05),K562细胞组与K562/ADM+ CSA非细胞毒性剂量+As203非细胞毒性剂量组比较差异无显著性(P>0.05)。结论1.环孢素A和三氧化二砷能抑制K562、K562/ADM细胞的增殖,K562/ADM细胞对环孢素A和三氧化二砷不具有耐药性。2.非细胞毒性剂量的环孢素A和三氧化二砷联合作用于K562/ADM细胞,毒性无增加,疗效较两者单独应用增加。3.非细胞毒性剂量的环孢素A和三氧化二砷联合作用于K562/ADM细胞,使MDR-1基因、P-gp蛋白表达下调,hMLH1基因、hMLH1蛋白表达上调,它们可能参与了K562/ADM细胞MDR的形成。