神经氨酸酶预处理供体骨髓细胞延长大鼠同种异体皮存活的研究

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背景与目的:对于大面积深度烧伤患者而言,自体皮源不足的问题尤为突出,但移植排斥反应与应用免疫抑制剂的严重副作用之间的矛盾一直困扰着异基因皮肤移植的临床应用。所以,如何延长异基因移植皮肤在烧伤创面的存活时间是烧伤早期创面处理研究的重要课题之一。肝脏位于胃肠道与腔静脉系统之间,其独特的解剖学位置和代谢内环境决定其在免疫调节中发挥重要的作用,而门静脉穿刺操作复杂,又有许多并发症发生的危险,使其临床应用受到制约。 有研究表明,肝细胞表面有无唾液酸糖蛋白的受体,而经神经氨酸酶(neuraminidase,Neu)预处理的淋巴细胞或骨髓细胞(bone marrow cells,BMCs)表面则富含无唾液酸糖蛋白。因此经Neu预处理能增强淋巴细胞或BMCs对肝脏的亲和性。本研究以大鼠为研究对象,观察Neu预处理对BMCs经外周静脉注射后在受体内的分布、造血集落及外周血嵌合体形成的影响,筛选出使dBMCs偏向性分于受体肝脏的Neu最适预处理浓度。并在此基础上,探讨Neu预处理供体BMCs经外周静脉输注对异体皮肤存活的影响,预期寻求一种创伤小、易于操作而又安全可靠的免疫耐受诱导方法。 方法: 1.以Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠作为BMCs的供体,以Wistar雌性大鼠作为受体,采用四种不同浓度(0,0.5,1.0,2.0 U/ml)的Neu预处理SD雄性大鼠dBMCs,以99Tcm-SnCl2法标记,经Wistar雌性大鼠尾静脉注射,观察dBMCs在受体内各主要组织器官的分布。 2.实验对象及分组同上,在尾静脉输注15天后取受体Wistar大鼠全身各主要器官行病理组织学观察造血集落的形成情况;从受体外周血提出全血DNA,PCR扩增后凝胶电泳分析,检测有无供体特异性的SRY的目的基因片断。 3.在上述实验基础上,联合短期应用环孢素A(Cyclosporin A,CsA),用SD大鼠(♂)作为BMCs和异体皮的供体,Wistar大鼠(♀)作为受体,观察异体皮的存活情况。以此分析使BMCs偏向性分布于受体肝脏内的最适预处理浓度能否诱导延长异体皮的存活时间。
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