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目的:探讨CH25H在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染的RAW264.7巨噬细胞中的表达;探讨CH25H对巨噬细胞内及小鼠体内Mtb存活的影响及可能机制。方法:体外实验:Mtb以MOI=10感染巨噬细胞,RT-PCR和Western blot分别检测感染6 h、12 h、24 h和48 h后CH25H的m RNA和蛋白水平表达。过表达、干扰表达重组质粒转染巨噬细胞后再以MOI=10进行感染,罗氏培养检测Mtb存活情况;油红O染色等检测巨噬细胞内脂质代谢情况;AO/EB等检测调控CH25H对Mtb感染后巨噬细胞活性的影响。RT-PCR检测调控CH25H对其可能的下游基因CD5L、caspase-1、caspase-3 m RNA水平表达的影响。体内实验:BALB/c小鼠先通过滴鼻途径给予质粒再进行感染,感染后继续给予质粒持续10周,分3个批次处死。小鼠肺、脾组织充分匀浆后接种于罗氏培养基,计算肺、脾荷菌量;肺、脾组织石蜡切片经抗酸染色、HE染色观察其病理改变。结果:体外实验:(1)PCR结果显示,与正常组(0.309±0.038)相比,感染组6 h(0.499±0.095)(P<0.05)、12 h(0.624±0.122)(P<0.01)、24 h(0.941±0.088)(P<0.001)和48 h(0.575±0.039)(P<0.01)CH25H m RNA表达水平均升高。Western blot结果显示,与正常组(0.459±0.119)相比,感染组6 h(0.645±0.048)(P<0.05)、12 h(0.707±0.088)(P<0.01)、24 h(1.056±0.098)(P<0.001)和48 h(0.792±0.098)(P<0.01)CH25H的蛋白表达水平均升高。(2)调控CH25H后菌落计数显示,上调组(4.667±0.577)(t=4.95,P<0.01)较其对照组(2.333±0.577)增多;下调组(0.667±0.577)(t=3.536,P<0.05)较其对照组(2.333±0.577)减少。油红O染色显示上调组脂滴含量增多,下调组脂滴含量减少。AO/EB检测细胞凋亡指数结果显示,上调组(22.23±6.02)%(t=5.959,P<0.01)较其对照组(46.2±3.51)%降低;下调组(71.07±5.15)%(t=9.277,P<0.01)较其对照组(33.37±4.8)%升高。(3)PCR结果显示,上调组CD5L(1.311±0.076)(t=9.773,P<0.01)较其对照组(0.833±0.038)m RNA表达升高,caspase-1(0.677±0.094)(t=4.587,P<0.05)、caspase-3(0.722±0.113)(t=3.676,P<0.05)较其对照组(1.076±0.118)、(1.054±0.108)m RNA表达降低;下调组CD5L(0.565±0.089)(t=2.824,P<0.05)较其对照组(0.983±0.241)m RNA表达降低,caspase-1(1.392±0.09)(t=7.263,P<0.01)、caspase-3(1.107±0.192)(t=3.193,P<0.05)较其对照组(0.754±0.123)、(0.689±0.122)m RNA表达升高。体内实验:(1)小鼠感染6周,上调组肺荷菌量(3.66±0.108)(t=6.928,P<0.01)、脾荷菌量(3.68±0.107)(t=4.817,P<0.01)较其对照组(3.22±0.02)、(3.30±0.085)均升高;下调组脾荷菌量(2.85±0.352)(t=2.859,P<0.05)较其对照组(3.46±0.118)降低。小鼠感染10周,上调组肺荷菌量(4.52±0.067)(t=8.398,P<0.01)、脾荷菌量(4.02±0.06)(t=6.852,P<0.01)较其对照组(3.7±0.156)、(3.26±0.183)均升高;下调组肺荷菌量(2.90±0.369)(t=2.812,P<0.05)、脾荷菌量(2.86±0.334)(t=3.013,P<0.05)较其对照组(3.72±0.345)、(3.57±0.234)均降低。(2)小鼠肺、脾组织抗酸染色除正常组外均发现Mtb;HE染色显示正常组肺、脾组织无炎症细胞浸润,结构完整,各感染组及调控组肺泡结构被破坏,出现炎症细胞浸润;脾组织充血,淋巴细胞增生。不同感染时间上调组病变程度逐渐加重,下调组病变程度较轻。结论:(1)CH25H能够促进Mtb在巨噬细胞内存活。(2)CH25H促进巨噬细胞内Mtb存活可能与促进脂质合成及通过CD5L、caspase通路抑制细胞凋亡有关。(3)CH25H能够促进小鼠体内Mtb存活,加重组织病变程度。