【摘 要】
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目的:探讨敲减ECEL1基因对人肝癌细胞(BEL-7404)在体内生长的影响,为临床上肝癌的靶向治疗提供新的依据。方法:(1)制备成瘤细胞:将肝癌细胞系(BEL-7404)进行培养传代,取处于
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目的:探讨敲减ECEL1基因对人肝癌细胞(BEL-7404)在体内生长的影响,为临床上肝癌的靶向治疗提供新的依据。方法:(1)制备成瘤细胞:将肝癌细胞系(BEL-7404)进行培养传代,取处于对数生长期的人肝癌细胞细胞进行实验。分别使用CON053慢病毒和LV-ECEL1-RNAi(48784-1)慢病毒感染肝癌细胞株(BEL-7404),另设空白对照组,72h后在荧光显微镜下观察感染效率。(2)动物成瘤实验:将20只裸鼠进行编号分组:对照组裸鼠体内注射未敲减ECEL1基因的人肝癌细胞;实验组裸鼠体内注射已经敲减ECEL1基因的人肝癌细胞。(3)观察两组裸鼠皮下瘤体变化情况,记录瘤体长短径、瘤体重量并计算瘤体体积,整理数据,进行对比分析。结果:(1)制备成瘤细胞结果:感染72小时后,在荧光显微镜下,观察到空白对照组未见荧光表达;感染携带ECEL1干扰质粒慢病毒的人肝癌细胞(BEL-7404)(KD组)及感染阴性对照病毒CON053的人肝癌细胞(BEL-7404)(NC组)均可见清晰的绿色荧光。两组荧光率均在80%以上,且细胞状态正常,说明制备成瘤细胞成功。(2)小鼠肝癌皮下移植瘤体体积的变化:皮下注射人肝癌细胞(BEL-7404)25天后,对照组的10只裸鼠均有瘤体形成,成瘤率为100%,实验组的10只裸鼠也均有瘤体形成,成瘤率为100%。观察期间,随着时间的延长,两组裸鼠体内瘤体体积不断增大,比较5个时间点的瘤体体积,得出实验组(KD组)相比较于对照组(NC组)增大速度更缓慢,两组不同时间点瘤体体积大小均有明显差异(p<0.05)。(3)小鼠肝癌皮下移植瘤体荧光表达量的变化:实验组(KD组)裸鼠瘤体区域内总荧光表达量(2.50E+10)与对照组(2.82E+10)比较明显减少,差异具有显著性(p=4.8337E-06)。(4)小鼠肝癌皮下移植瘤体重量的变化:将小鼠进行安乐死后,取出肿瘤瘤体并进行称重,结果显示KD组瘤体重量(0.457±0.220)较NC组(0.780±0.204)明显减小(p<0.05)。结论:敲减ECEL1基因能抑制人肝癌细胞(BEL-7404)在裸鼠体内的生长。
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