目的胶质瘤是一类起源于神经上皮组织的肿瘤,是中枢神经系统最常见的原发脑内肿瘤,在颅内各类型肿瘤中发病率为第一位,流行病学调查显示,尽管世界各地脑胶质瘤发病率存在差异,但整体而言其发病率约占原发性脑肿瘤的一半左右,且近年来还有上升的趋势。尽管有关胶质瘤的临床和基础研究有很大发展,但高级别胶质瘤病人的预后仍未得到明显改善,其部分原因在于胶质瘤如何调节宿主免疫系统方面未取得明显进展。既往研究表明,胶质瘤病人存在体液、细胞免疫缺陷,这样不仅降低了免疫系统抗肿瘤免疫反应,也使抗肿瘤免疫治疗更为困难。对胶质瘤分子发病机制的研究为其治疗提供了新的思路,目前国内外已经实施了多种基因治疗方案,如自杀基因治疗、反义治疗、免疫基因治疗、抑癌基因治疗、抑血管基因治疗等。表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)是一种具有多种生物学功能的小分子多肽。对许多上皮细胞、间质细胞和肿瘤细胞具有明显的促生长作用,在众多肿瘤中能够促进肿瘤细胞的增殖而加速肿瘤的生长。EGF通过与细胞膜上EGF受体结合发挥作用。研究表明EGF及其受体在胶质瘤中高表达,与胶质瘤的细胞增殖、分化程度、病理级别和预后密切相关。表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor, EGFG)的配体是表皮生长因子(EGF)、转化因子-a(TGF-a),二者与EGFR结合后可激活受体酪氨酸激酶,导致受体本身细胞内酪氨酸残基的磷酸化,从而提供细胞一个有丝分裂信号引起细胞分裂增殖。本实验主要观察不同浓度EGF对U87细胞增殖及细胞周期的影响,为进一步阐述胶质瘤发生机制提供实验依据。方法一、实验方法1、U87细胞培养含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中进行培养,培养条件为5%C02,37℃恒温培养。含血清培养基中的原代贴壁细胞在长至90%左右后进行传代。2、MTT法检测EGF对U87增殖的影响实验分组为：对照组、EGF 0.1ng/ml、EGF1.0ng/ml、EGF 10ng/ml。用酶标仪在450 nm处测定各孔的光密度(OD)值。每个剂量组设5个平行样。3、流式细胞仪检测EGF对U87细胞周期影响将对数生长期的U87细胞,加入含不同浓度的EGF,5%CO2,37℃分别恒温培养1,2,7天后,依据试剂盒说明书进行细胞周期检测4透射电镜观察EGF对U87细胞结构影响将对数生长期的U87细胞,加入含不同浓度的EGF,5%CO2,37℃分别恒温培养1,2,7天后,消化,离心,2.5%戊二醛固定液固定,送中国医科大学电镜中心进行电镜拍照。二、统计学分析应用医学统计软件SPSS 11.0进行分析,实验数据用X±S表示,组间采用t检验,P<0.05,结果1、细胞增殖活力能力检测EGF (0.1ng/ml, 1.0ng/ml)作用后,显著刺激U87细胞增殖(p<0.05)。2、细胞周期检测G1期、G2期、S期及PI(增殖指数)变大,p<0.05),DNA相对含量增高(p<0.05)。3、透射电镜观察EGF作用后细胞伪足增多。结论1、EGF在(0.1ng/ml, 1.0ng/ml)浓度下对U87细胞有增殖作用。2、EGF在(0.1ng/ml, 1.0ng/ml)浓度下,细胞处于活跃生长状态,细胞伪足增多