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金黄色葡萄球菌蛋白A能够与人及多种哺乳动物IgG的Fc段结合，而不影响IgG的抗体活性，因此应用广泛。以蛋白A为配基的亲和层析填料用于纯化IgG具有纯化倍数高、方法简单、易操作和高效等优点，但是由于其本身的一些特点，制约了该填料更广范围的应用。本文以制备具有洗脱条件温和、耐高浓度碱的重组蛋白A亲和填料及其应用为目的，以重组蛋白A的制备为中心，希望通过分子改造得到具有这些新特性的重组蛋白A。主要开展以下几方面工作：(1)重组菌的构建。设计重组蛋白A构建方法，选取天然蛋白A的B序列进行分子改造，在B序列第二个loop后面添加了6个甘氨酸以增加其长度，降低其与IgG的结合力，从而使洗脱条件更加温和。在此基础上对蛋白A耐高浓度碱的性能进行改造，将B序列第23、30位的天冬酰胺和苯丙氨酸分别替换成苏氨酸和丙氨酸，得到Z序列。将表达Z序列的基因序列命名为z，利用同尾酶构建z的五连体，并利用大肠杆菌的高效表达系统进行过量表达。(2)重组蛋白A亲和填料的制备。琼脂糖4FF基质材料经过烯丙基缩水甘油醚活化后，使用N-羟基丁二酰亚胺(NHS)对其进行修饰，最后偶联重组蛋白A。选择烯丙基缩水甘油醚的添加量为0.01g/mL，NHS和N-二环己基碳酰亚胺(DCC)的添加量为0.1g/mL。通过投料和偶联后蛋白浓度差计算重组蛋白A偶联密度为6.64mg/mL，约为0.187mol/mL。(3)对自制亲和填料性能的检验。自制重组蛋白A亲和填料对牛初乳IgG的结合量为0.180mg/mL，略低于GE rProteinASepharose4FF的0.196mg/mL。使用pH4.0的洗脱液可以将结合的IgG接近100%洗脱，使用pH5.0的洗脱缓冲液也能实现接近90%的洗脱率；使用0.1-2.0mol/L的NaOH溶液浸泡1h，对结合牛初乳IgG性能几乎没有影响，当使用2.0mol/L的NaOH溶液浸泡7h和14h后，自制重组蛋白A亲和填料对IgG的结合率分别为86.1%和72.8%，其洗脱条件和耐碱性能相比GE rProtein ASepharose4FF都得到了很好的改善。