南方鲇源豚鼠气单胞菌胞外产物活性与致病性研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:stanley_lippman
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“南方鲇溃疡综合症”是近年来南方鲇养殖中出现的一种急性致死性的细菌性传染病。该病具有流行广、发病快、死亡率高等特点,以体表溃疡、肝、脾、肾肿大,腹水和胃肠道充血、出血为主要特征。该病给我国南方鲇养殖业造成了严重的经济损失。本试验对南方鲇源豚鼠气单胞菌的胞外产物(extracellular products,ECP)的活性和致病性进行研究,并分离纯化得到一种分子量为32.2KD的溶血素,确定其为豚鼠气单胞菌的致病因子,以上研究为阐明该病的致病机理提供理论依据。具体试验方法及结果如下:(1)采用琼脂扩散法测定了南方鲇源豚鼠气单胞菌胞外产物酶活性和溶血活性,同时采用微量板法对胞外产物的细胞毒性进行了研究。结果显示:南方鲇源豚鼠气单胞菌胞外产物具有蛋白酶、脂酶、明胶酶和脲酶活性,同时具有很强的溶血活性和细胞毒性。(2)豚鼠气单胞菌胞外产物腹腔注射小白鼠,结果显示:豚鼠气单胞菌胞外产物对小白鼠具有明显的致病性,其LD50为1.70mg/kg体重。实验小鼠主要表现为呼吸困难,食欲减退;肝肿大;肺淤血,肠道扩张、壁变薄,肠腔内充有大量气体和黄色黏液。病理组织学上,心脏肌纤维变性,横纹消失,肌间毛细血管扩张充血、出血,部分肌浆凝固,红染;肝细胞空泡变性、坏死;肾间质增宽,炎性水肿,细胞离散,大量单核细胞、中性白细胞等炎性细胞渗出,肾小血管严重瘀血,肾小球充血;脾出血,淋巴细胞数量明显减少;肺微静脉扩张淤血,肺泡腔内充斥大量红细胞;肠绒毛坏死脱落;胃上皮变性、坏死,脱落,粘膜下层水肿,病变严重的病例可见固有膜、粘膜下层坏死。(3)豚鼠气单胞菌胞外产物肌肉注射南方鲇,结果显示:豚鼠气单胞菌胞外产物对南方鲇具有明显的致病性,其LD50为0.802mg/kg。试验鱼主要表现为体表溃疡、腹水;肝、脾、肾肿大,充血,出血;胃积液,胃表面充血;肠腔内充有大量黄色粘液。病理组织学上表现骨骼肌和心肌坏死断裂,炎症细胞浸润;肝脏严重的空泡变性;肾小管上皮细胞变性、坏死、间质间大量炎症细胞浸润;脾充血出血,淋巴细胞减少;胃肠粘膜上皮细胞变性坏死脱落。细胞病理学上,病鱼主要器官的细胞均有较为严重的损伤,细胞肿胀,超微结构破坏。具体表现为肌纤维坏死,明暗带模糊不清;肝细胞内出现大量空泡,线粒体肿胀,染色质聚集边移;脾淋巴细胞染色质溶解消失,线粒体肿胀;肾脏内大量的白细胞浸润,上皮细胞坏死。血液病理变化表现为注射后24小时和48小时,RBC和Hb含量显著减少,WBC增加,红细胞脆性增加,血清中的AST、ALT、LDH活性显著升高和Cr含量也显著升高。(4)采用硫酸铵盐析,DEAE-Sephadex A50凝胶层析法从豚鼠气单胞菌胞外产物中提纯了一种分子量为32.2KDa的单一多肽溶血素。该溶血活性强,溶血价为25,对南方鲇有致病性,其LD50为0.29 mg/kg体重。注射后的南方鲇表现为腹部膨大、腹水,肝、脾、肾肿大,淤血、出血;胃肠道内充有大量粘液,粘膜充血、出血。组织病理学表现为骨骼肌水肿,变性,肌浆红染,甚至肌纤维坏死,溶解、断裂;肝细胞变性、坏死,血窦扩张淤血;肾小管上皮细胞变性、坏死,病变严重的整个肾小管的结构完全消失,间质造血拟淋巴细胞减少,大量巨噬细胞浸润;脾充充血,出血,淋巴细胞坏死,数量减少;胃肠到粘膜上皮变性、坏死,脱落。
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