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目的：探究穴位贴敷疗法对过敏性鼻炎大鼠的治疗作用是否与抑制神经生长因子及其下游通路蛋白的的表达和抗炎有关，并掌握不同强度穴位敷贴的疗效规律。
方法：制备冬病夏治药膏，配方为白芥子、延胡索、细辛、白芷按2:2:1:1配伍，共研100目细末；分别以生姜汁和蜂蜜调制制作成贴敷药膏密封保存备用。选用雄性清洁级SD大鼠120只，体重180-220g。按照随机数表法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、1h生姜调制贴敷组、1h蜂蜜调制贴敷组、4h蜂蜜调制贴敷组等5组。建立AR大鼠模型，并根据行为学评分标准对AR模型进行评价。除对照组和模型组每天给予等量蜂蜜贴敷1h外，各治疗组分别贴敷生姜调制药膏1h、蜂蜜调制药膏1h和4h；均连续贴敷28d。
1检测指标
1.1行为学观察并评分：分别对穴位贴敷前的大鼠、穴位贴敷治疗7天后的大鼠、穴位贴敷治疗14天后的大鼠、穴位贴敷治疗28天后的大鼠的打喷嚏次数、擦鼻子次数和流鼻涕的程度进行观察并进行评分记录，最后进行比较1.2蛋白质免疫印迹法检测鼻黏膜组织神经生长因子及其下游通路蛋白IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的蛋白表达情况
1.3免疫荧光技术检测鼻粘膜中组织NGF及IL-4、IFN-γ的表达，观察其表达情况
1.4实时荧光定量PCR检测鼻黏膜组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13、IgE和IFN-γmRNA基因水平的表达
1.5双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测过敏性鼻炎大鼠血清中NGF、IL-4、IL-5、IL-13、IgE和IFN-γ的含量
1.6HE染色法观察AR大鼠鼻黏膜的病理变化和甲苯胺蓝染色法检测AR大鼠鼻黏膜组织中肥大细胞数量和病理形态的变化
结果：
1行为学评分
对穴位贴敷前及穴位贴敷7天后、14天后、28天后大鼠打喷嚏次数、擦鼻子次数及流鼻涕的程度进行行为学评分并记录。结果显示：C组大鼠均无明显症状；穴位贴敷治疗后第7天各组大鼠评分比较无统计学差异（p＞0.05）；贴敷14天和贴敷28天，与同期M组相比，1HG组、4HH组行为学评分明显降低（p＜0.01）；与1HG组相比，4HH组行为学评分都有明显降低（p＜0.01）。2蛋白质免疫印迹法检测鼻黏膜中神经生长因子及其下游通路蛋白IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的蛋白表达情况
与对照组比较，模型组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13蛋白表达均升高（p＜0.001，p＜0.01）,IFN-γ蛋白表达略有上升（p＞0.05）；与模型组相比，1HG组、4HH组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13蛋白表达均降低（p＜0.001,p＜0.01，p＜0.05），IFN-γ蛋白表达上升(p＜0.01)；与1HG组相比，4HH组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13蛋白表达明显降低（p＜0.05），IFN-γ蛋白表达明显上升（p＜0.05）。
3免疫荧光技术检测鼻粘膜中NGF及IL-4、IFN-γ的表达，观察其定位情况
与对照组相比，模型组大鼠鼻黏膜组织中NGF、IL-4蛋白的阳性点均明显增多（p＜0.01，p＜0.05），IFN-γ蛋白的阳性点增加地并不明显（p＞0.05）；在经过穴位贴敷治疗28天后，免疫荧光结果显示，1H生姜组、4H蜂蜜组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4蛋白的阳性点较模型组都明显减少（p＜0.01，p＜0.05）;与1HG组相比，4HH组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4蛋白的阳性点明显减少（p＜0.05），IFN-γ蛋白的阳性点明显增加（p＜0.05）
4实时荧光定量PCR检测鼻黏膜中NGF、IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ和IgEmRNA基因水平的表达
与对照组相比，模型组大鼠组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13和IgEmRNA表达均升高（p＜0.001）,IFN-γmRNA表达略有上升（p＞0.05）；与模型组相比，1HG组、4HH组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13和IgEmRNA表达均降低（p＜0.001,p＜0.01），IFN-γmRNA表达上升(p＜0.01，p＜0.001)；与1HG组相比，4HH组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13和IgEmRNA表达明显降低（p＜0.001，p＜0.05，p＜0.01），IFN-γmRNA表达明显上升（p＜0.01）。5双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测过敏性鼻炎大鼠血清中NGF、IL-4、IL-5、IL-13、IgE和IFN-γ的含量
与对照组相比，模型组大鼠血清中NGF、IL-4、IL-5、IL-13和IgE表达均升高（p＜0.001）,IFN-γ表达略有上升（p＞0.05）；与模型组相比，1HG组、4HH组大鼠血清中NGF、IL-4、IL-5、IL-13和IgE表达均降低（p＜0.001,p＜0.01），IFN-γ表达上升(P＜0.05，p＜0.001)；与1HG组相比，4HH组大鼠血清中NGF、IL-4、IL-5、IL-13和IgE表达明显降低（p＜0.05，p＜0.01），IFN-γ表达明显上升（p＜0.05）。
6HE染色法观察AR大鼠鼻黏膜的病理变化和甲苯胺蓝染色法检测AR大鼠鼻黏膜组织中肥大细胞数量和病理形态的变化
HE染色：对照组鼻粘膜组织未见明显病理学改变；模型组大鼠鼻黏膜充血，水肿，腺体增生，黏液大量分泌，组织结构紊乱，大量炎性细胞浸润；在经过28天的穴位贴敷治疗后，1H生姜组、1H蜂蜜组、4H蜂蜜组的病理程度都明显减轻，炎性细胞浸润减少。其中4H蜂蜜组的病理程度减轻的最为明显，鼻黏膜中的炎性细胞数量最少。
甲苯胺蓝染色法：对照组鼻粘膜组织并未见到肥大细胞，模型组可见大量紫红色的肥大细胞，在经过28天的治疗后，1H生姜组、1H蜂蜜组、4H蜂蜜组的肥大细胞数量都有减少，其中以4H蜂蜜组的减少地最为明显。
结论：
1.穴位贴敷疗法能改善过敏性鼻炎大鼠的过敏性炎症反应，而且在不同的贴敷强度下，治疗的效果不同。在一定的贴敷时间范围内，贴敷时间越长，治疗的作用效果越明显。
2.穴位贴敷疗法能降低AR大鼠鼻黏膜组织中NGF，IL-4，IL-13,IL-5和IgE的表达，并增强IFN-γ的表达，提示穴位贴敷疗法可能通过NGF/IL-4途径来改善AR大鼠的过敏性炎症反应。
方法：制备冬病夏治药膏，配方为白芥子、延胡索、细辛、白芷按2:2:1:1配伍，共研100目细末；分别以生姜汁和蜂蜜调制制作成贴敷药膏密封保存备用。选用雄性清洁级SD大鼠120只，体重180-220g。按照随机数表法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、1h生姜调制贴敷组、1h蜂蜜调制贴敷组、4h蜂蜜调制贴敷组等5组。建立AR大鼠模型，并根据行为学评分标准对AR模型进行评价。除对照组和模型组每天给予等量蜂蜜贴敷1h外，各治疗组分别贴敷生姜调制药膏1h、蜂蜜调制药膏1h和4h；均连续贴敷28d。
1检测指标
1.1行为学观察并评分：分别对穴位贴敷前的大鼠、穴位贴敷治疗7天后的大鼠、穴位贴敷治疗14天后的大鼠、穴位贴敷治疗28天后的大鼠的打喷嚏次数、擦鼻子次数和流鼻涕的程度进行观察并进行评分记录，最后进行比较1.2蛋白质免疫印迹法检测鼻黏膜组织神经生长因子及其下游通路蛋白IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的蛋白表达情况
1.3免疫荧光技术检测鼻粘膜中组织NGF及IL-4、IFN-γ的表达，观察其表达情况
1.4实时荧光定量PCR检测鼻黏膜组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13、IgE和IFN-γmRNA基因水平的表达
1.5双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测过敏性鼻炎大鼠血清中NGF、IL-4、IL-5、IL-13、IgE和IFN-γ的含量
1.6HE染色法观察AR大鼠鼻黏膜的病理变化和甲苯胺蓝染色法检测AR大鼠鼻黏膜组织中肥大细胞数量和病理形态的变化
结果：
1行为学评分
对穴位贴敷前及穴位贴敷7天后、14天后、28天后大鼠打喷嚏次数、擦鼻子次数及流鼻涕的程度进行行为学评分并记录。结果显示：C组大鼠均无明显症状；穴位贴敷治疗后第7天各组大鼠评分比较无统计学差异（p＞0.05）；贴敷14天和贴敷28天，与同期M组相比，1HG组、4HH组行为学评分明显降低（p＜0.01）；与1HG组相比，4HH组行为学评分都有明显降低（p＜0.01）。2蛋白质免疫印迹法检测鼻黏膜中神经生长因子及其下游通路蛋白IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的蛋白表达情况
与对照组比较，模型组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13蛋白表达均升高（p＜0.001，p＜0.01）,IFN-γ蛋白表达略有上升（p＞0.05）；与模型组相比，1HG组、4HH组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13蛋白表达均降低（p＜0.001,p＜0.01，p＜0.05），IFN-γ蛋白表达上升(p＜0.01)；与1HG组相比，4HH组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13蛋白表达明显降低（p＜0.05），IFN-γ蛋白表达明显上升（p＜0.05）。
3免疫荧光技术检测鼻粘膜中NGF及IL-4、IFN-γ的表达，观察其定位情况
与对照组相比，模型组大鼠鼻黏膜组织中NGF、IL-4蛋白的阳性点均明显增多（p＜0.01，p＜0.05），IFN-γ蛋白的阳性点增加地并不明显（p＞0.05）；在经过穴位贴敷治疗28天后，免疫荧光结果显示，1H生姜组、4H蜂蜜组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4蛋白的阳性点较模型组都明显减少（p＜0.01，p＜0.05）;与1HG组相比，4HH组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4蛋白的阳性点明显减少（p＜0.05），IFN-γ蛋白的阳性点明显增加（p＜0.05）
4实时荧光定量PCR检测鼻黏膜中NGF、IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ和IgEmRNA基因水平的表达
与对照组相比，模型组大鼠组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13和IgEmRNA表达均升高（p＜0.001）,IFN-γmRNA表达略有上升（p＞0.05）；与模型组相比，1HG组、4HH组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13和IgEmRNA表达均降低（p＜0.001,p＜0.01），IFN-γmRNA表达上升(p＜0.01，p＜0.001)；与1HG组相比，4HH组大鼠鼻黏膜组织NGF、IL-4、IL-5、IL-13和IgEmRNA表达明显降低（p＜0.001，p＜0.05，p＜0.01），IFN-γmRNA表达明显上升（p＜0.01）。5双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测过敏性鼻炎大鼠血清中NGF、IL-4、IL-5、IL-13、IgE和IFN-γ的含量
与对照组相比，模型组大鼠血清中NGF、IL-4、IL-5、IL-13和IgE表达均升高（p＜0.001）,IFN-γ表达略有上升（p＞0.05）；与模型组相比，1HG组、4HH组大鼠血清中NGF、IL-4、IL-5、IL-13和IgE表达均降低（p＜0.001,p＜0.01），IFN-γ表达上升(P＜0.05，p＜0.001)；与1HG组相比，4HH组大鼠血清中NGF、IL-4、IL-5、IL-13和IgE表达明显降低（p＜0.05，p＜0.01），IFN-γ表达明显上升（p＜0.05）。
6HE染色法观察AR大鼠鼻黏膜的病理变化和甲苯胺蓝染色法检测AR大鼠鼻黏膜组织中肥大细胞数量和病理形态的变化
HE染色：对照组鼻粘膜组织未见明显病理学改变；模型组大鼠鼻黏膜充血，水肿，腺体增生，黏液大量分泌，组织结构紊乱，大量炎性细胞浸润；在经过28天的穴位贴敷治疗后，1H生姜组、1H蜂蜜组、4H蜂蜜组的病理程度都明显减轻，炎性细胞浸润减少。其中4H蜂蜜组的病理程度减轻的最为明显，鼻黏膜中的炎性细胞数量最少。
甲苯胺蓝染色法：对照组鼻粘膜组织并未见到肥大细胞，模型组可见大量紫红色的肥大细胞，在经过28天的治疗后，1H生姜组、1H蜂蜜组、4H蜂蜜组的肥大细胞数量都有减少，其中以4H蜂蜜组的减少地最为明显。
结论：
1.穴位贴敷疗法能改善过敏性鼻炎大鼠的过敏性炎症反应，而且在不同的贴敷强度下，治疗的效果不同。在一定的贴敷时间范围内，贴敷时间越长，治疗的作用效果越明显。
2.穴位贴敷疗法能降低AR大鼠鼻黏膜组织中NGF，IL-4，IL-13,IL-5和IgE的表达，并增强IFN-γ的表达，提示穴位贴敷疗法可能通过NGF/IL-4途径来改善AR大鼠的过敏性炎症反应。