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口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)是一种原因不明的慢性浅在性皮肤黏膜炎性疾病,为口腔黏膜的常见病、多发病,具有一定的癌变危险,世界卫生组织(WHO)将其定义为癌前状态。该病患病率为0.5~2.2%,好发年龄段为30~60岁,男女构成比为1:2,癌变率为1~3%。由于OLP病因不明,缺乏特效疗法,仍需要对其进行大量的临床基础研究。
蛋白质组(Proteome)是指一个细胞、组织或者机体表达的所有蛋白质,蛋白质组学(Proteomics)是指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴学科,目的是从整体水平分析细胞内动态变化的蛋白质结构、表达水平与翻译后修饰、细胞内的定位,了解蛋白质之间的相互作用与联系,揭示蛋白质功能与细胞活动规律,近年来由于蛋白质组研究广泛应用于临床医学,为探究OLP的发病机制及诊治方法提供了新的途径。
目的:
建立人OLP及正常黏膜组织的双向凝胶电泳图谱,分析其差异表达的蛋白质,筛选分子标记物。
方法:
(1)收集OLP及正常口腔黏膜组织,提取组织蛋白,蛋白定量。
(2)采用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳(two—dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离OLP及正常黏膜组织的总蛋白质,银染显色,Imagemaster图像分析软件分析差异蛋白质点。
(3)基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF—MS)分析鉴定表达差异量较大的蛋白质点,确定所分析的蛋白质类型和功能。
(4)Western Blotting验证差异表达的蛋白。
结果:
(1)人OLP及正常黏膜组织凝胶的平均蛋白质点数分别为1576±67和1608±73,凝胶图谱分辨率、重复性较好。
(2)通过比较人OLP与正常黏膜组织的双向凝胶电泳图谱,得到差异表达蛋白质点数为13个,其中7个点在OLP中为高标达,6个点在OLP中为低表达。选择10个表达差异量较大的蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定了其中的4个点,包括有波形蛋白,膜联蛋白—Ⅰ,锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD),unknown蛋白等。
(3)Western Blotting验证差异表达的蛋白。
结论:
(1)本研究建立了分辨率高且重复性较好的人OLP及正常黏膜组织的双向凝胶电泳图谱,发现存在一些差异表达的蛋白质,为进一步筛选人OLP特异性的分子标志物奠定了基础。
(2)波形蛋白,膜联蛋白—Ⅰ,锰超氧化物歧化酶可能参与了OLP的发生和发展,unknown蛋白是否为OLP的特异性蛋白,能否作为OLP的分子标记,尚待进一步阐明。