【摘 要】
：
牛呼吸道合胞体病是由牛呼吸道合胞体病毒（Bovine respiratory syncytial virus,BRSV）引起的一种呼吸系统疾病,该病在全世界分布广泛,其死亡率不高,但发病率很高,一般多发于冬季,对养牛业造成巨大损失。由于病毒粒子较脆弱以及对细胞适应性较差,所以导致病毒分离较困难,一般情况下难以成功。为评估内蒙古地区牛感染BRSV的情况,本实验室在2018年3月至2019年5月期间,
论文部分内容阅读
牛呼吸道合胞体病是由牛呼吸道合胞体病毒（Bovine respiratory syncytial virus,BRSV）引起的一种呼吸系统疾病,该病在全世界分布广泛,其死亡率不高,但发病率很高,一般多发于冬季,对养牛业造成巨大损失。由于病毒粒子较脆弱以及对细胞适应性较差,所以导致病毒分离较困难,一般情况下难以成功。为评估内蒙古地区牛感染BRSV的情况,本实验室在2018年3月至2019年5月期间,从巴彦淖尔、通辽、乌兰浩特、鄂尔多斯、赤峰及呼和浩特这6个地区从有轻度呼吸道症状的牛中随机采集了302份鼻拭子,用RT-PCR的方法检测其阳性率,并送去测序。然后针对BRSV G基因利用生物学软件分析其抗原区,找到相应的核苷酸序列,设计一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增BRSV G基因片段并构建表达载体p ET-32a-G,进而对G蛋白进行诱导表达并优化其诱导条件,并用Ni-IDA亲和层析法纯化蛋白,用BCA法蛋白质浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度;然后通过SDS-PAGE和Western-blot方法对G蛋白进行分析与鉴定。用表达好的G蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并用间接ELISA方法测定其抗体效价,将其与标准BRSV阳性血清做对比。结果表明:牛呼吸道合胞病毒（BRSV）总阳性检出率为6.95%（21/302）,其中3.97%为BRSV和BPIV-3混合感染。利用BRSV c DNA为模板成功扩增了G基因,正确构建了p ET-32a-G重组质粒,通过诱导表达获得了分子质量为40 k Da可溶性G重组蛋白。优化表达条件后,纯化浓缩后蛋白浓度为2.07 mg/m L。经Western-blot检测,发现该蛋白具有反应原性。成功制备了多克隆抗体,其最高抗体滴度为217,标准BRSV阳性血清抗体滴度为219,经对比后,证明制备的多克隆抗体滴度较高。综上,本研究为下一步建立BRSV抗体间接ELISA检测方法及亚单位疫苗的研制奠定了基础。
其他文献
CLA能够诱导细胞凋亡,并且使动物体内脂肪沉积减少,但并不了解其具体的作用机制。本论文运用动物营养学技术和分子生物学方法,探讨了日粮中添加不同水平CLA对绵羊脂肪组织细胞凋亡的影响,研究其可能存在的作用途径。本试验将18只绵羊随机分为3组,每组6只羊,分别为对照组、1.5%CLA组和3.5%CLA组。试验期75天,其中预饲期15天,正饲期60天。试验分为以下内容:试验一:日粮中添加不同水平的CLA
猫传染性腹膜炎（Feline Infectious Peritonitis,FIP）是由猫冠状病毒所致的进行性、高致死率（100%）的全身性疾病。其病原为猫冠状病毒（Felinecoronavirus,FCoV）,属于α冠状病毒-1的一个亚种,单股正链RNA病毒。RNA病毒由于缺乏内在的校对功能,可以迅速突变,导致新病毒的出现。尽管FIP具有很高的致死率,但仍然没有有效的疫苗,而且我国关于FIP完
黑须污蝇是侵害双峰驼阴道引起阴道蝇蛆病的主要病原,给骆驼的繁殖及健康带来很大危害。本文在前期研究基础上,采用超景深成像仪对雌雄黑须污蝇尾器进行鉴别,通过扫描电镜对雌雄触角形态观察,以雌雄触角为样本进行转录组研究以及嗅觉相关基因的荧光定量分析。结果表明:1.雌雄尾器结构区别是雌蝇腹部末端边缘呈锯齿状,尾器向内凹陷,肛乳突呈灰白色。雄蝇腹部末端边缘平滑,尾器向外凸起,暗黄色囊形突呈匙状膨大。2.黑须污
microRNAs（miRNAs）是一类长度约为22nt的非编码RNA,它在多个生物学过程中对m RNA发挥转录后调控作用。绒山羊毛囊形态发生的标志性事件是上皮细胞、真皮成纤维细胞形成基板（Placode,PC）和真皮聚集（Dermal Condensate,DC）,这期间涉及到多个信号分子动态调节,但这些关键信号分子诱导的相关细胞生物学机制尚未见报道。本研究对课题组前期构建的内蒙古绒山羊胎儿期皮
本研究旨在评估营养调控对慢性热应激条件下的放牧妊娠牛生殖相关激素水平、血液指标、瘤胃发酵参数及肠道微生物多样性的影响。为天然草原放牧饲养下,肉用繁殖母牛养殖业采用营养调控缓解热应激提供科学参考。具体内容如下:试验一:选取夏季持续热应激天然草场放牧的西门塔尔妊娠牛作为试验对象,随机分为2组。对照组妊娠牛每天自然放牧,营养调控组妊娠牛在此基础上补充饲喂精料2.5kg/d。每天记录草场温湿指数,在试验期
哺乳动物卵丘-卵母细胞复合体（Cumulus-oocyte complex,COC）内存在的间隙连接交流（Gap junctional connection,GJC）为卵母细胞成熟过程所需信息交流与营养传递,提供必要支持。间隙连接蛋白37（Connexin 37,Cx37）是卵母细胞分泌的主要间隙连接蛋白之一,对卵子发生与卵泡发育过程有着重要作用。高水平环腺苷酸（Cyclic adenosine
近年来,由粪肠球菌引发的伤口感染、胃肠道疾病、呼吸道疾病、泌尿道或生殖道感染等疾病逐渐增加,不断有动物和人因粪肠球菌感染而发病导致死亡的严重案例。由于抗生素的广泛使用甚至滥用,使得粪肠球菌的耐药性也在逐渐增强,此外,粪肠球菌还会形成生物被膜[4],给临床治疗带来了巨大的难度。该菌严重威胁人类的生产生活和公共卫生安全。试验首先合成并鉴定了抗菌肽LL-37,通过其对不同菌种的杀菌作用比较,证明LL-3
基因编辑是当前发展最为迅速的生物技术之一,对动物育种工作进程的加快意义重大,利用基因编辑技术制备出了数量、类型丰富的基因编辑动物。然而,在基因编辑动物制备过程中仍然存在生产效率低等问题亟需解决,核心在于基因编辑技术实施与胚胎移植技术的衔接。本研究以基因编辑绒山羊及子午岭黑山羊制备为契机,深入研究了基因编辑动物制备过程中胚胎移植技术开展的注意事项。结果表明:1对82只陕北绒山羊进行了超数排卵处理,8
我国有丰富的山羊品种资源,具有非常明显的特征,如高繁殖性、抗逆性、耐粗饲等特点。其中绒山羊以其优良的纤维生产特性在我们的日常生活中起着重要的作用。关于羊绒的研究始于二十世纪五十年代,随着羊绒加工业的发展,羊绒市场也出现了供不应求、价格上涨的趋势,国内外的羊绒消耗需求日益增长,因此我国优质的羊绒生产及研究也得到了有益发展。然而研究表明近年来羊绒的纤维细度变得越来越粗,羊绒的细度及质量受到绒山羊研究人
樟子松是一种生命力非常顽强的乔木,生长迅速,寿命长,根系强大,有良好的保土防风性能,因而常作为北方地区的优势树种之一。天然林禁伐以来,为了缓解国内木材供应量不足,需要进一步克服人工林的缺陷,提高木材的高品质利用率,充分发挥与利用人工速生林的优势,实现小材大用、劣材优用的目标。木材干燥是木制品加工过程中最主要的一道工序,是合理利用木材、节约木材的重要技术措施,是直接影响木制品质量的关键,对节能、降耗