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肾间质纤维化(Renalinterstitiumfibrosis,RIF)是各种肾脏疾病进展至终末期的共同途径,是多种原因引起的细胞外基质成分在肾间质内过度沉积造成的。近年研究显示肾功能受损与小管间质损伤密切相关,其影响程度大于肾小球病变程度的影响。延缓其进程将有利于肾功能的保护。
温阳活血方是临床验之有效的一个复方,临床证明温阳活血方对于防止肾小管间质纤维化,保护肾功能起有益的作用,具有很好的应用前景,单侧输尿管梗阻(Unilateralureteralobstruction,UUO)是以进行性小管间质纤维化为特征的实验性肾病模型,也是研究小管间质纤维化常用的动物模型。本试验采用温阳活血方对UUO小鼠进行治疗,以观察其对肾小管标志蛋白,肾脏组织中结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)、转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)、核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)表达的影响。
材料与方法:1、实验动物的选择与分组雄性Wistar大鼠48只,体重为150-200克。随机将40只行左侧输尿管结扎,再随机分为UUO模型组8只、温阳活血治疗组8只、桃仁治疗组8只,肉苁蓉治疗组8只,蒙诺治疗组8只;假手术组8只分离但不结扎输尿管,各组予手术后24小时开始灌胃给药,假手术组和模型组予等量生理盐水,于用药14天后检测指标。
2、实验方法(1)ELISA法测尿β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)、比浊法测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG);(2)全自动生化分析仪测血肌酐(bloodcreatinine,Scr)、尿素氮(bloodureanitroge,BUN);(3)HE染色检测常规病理;(4)免疫组织化学法观察CTGF、TGF-β1、NF-κB在各组大鼠肾脏表达。
3、统计方法采用SPSS13.0统计软件分析所得数据,各组数据以均数土标准差表示,多组资料间比较采用单因素方差分析,LSD法多重比较组间差异。以P<0.05判断为差异具有显著性。
结果与讨论:1、各组大鼠肾功能测定结果UUO后第14天后,UUO模型组尿素氮水平与假手术组相比有显著增高,温阳活血治疗组、蒙诺治疗组与UUO模型组相比有显著降低。但各组肌酐水平无明显差异。
2、各组大鼠肾小管标志蛋白测定结果温阳活血治疗组、蒙诺治疗组、桃仁治疗组和肉苁蓉治疗组均能减少NAG水平,其中温阳活血治疗组、桃仁治疗组和蒙诺治疗组效果更显著。但仅有温阳活血方、蒙诺、桃仁可减少β2-MG水平,且温阳活血治疗组和蒙诺治疗组效果较桃仁更显著。
3、大鼠单侧输尿管梗阻后肾小管间质病理改变假手术组肾脏未见病理改变,模型组可见肾小管上皮细胞大量萎缩、空泡变性,皮质和近髓萎缩肾小管较多,间质内大量炎性细胞浸润,并出现间质纤维化明显。而蒙诺治疗组、温阳活血治疗组、桃仁治疗组间质内炎细胞呈小灶性浸润,肾小管上皮细胞变性萎缩和间质纤维化范围比UUO模型组轻。
4、肾小管间质中NF-κB的表达与正常组相比较,在模型组、桃仁治疗组、肉苁蓉治疗组、蒙诺治疗组和温阳活血治疗组,NF-κB表达均增加。NF-κB在温阳活血治疗组、桃仁治疗组和蒙诺组的表达与模型组相比较,有显著降低。且温阳活血治疗组、桃仁治疗组和蒙诺治疗组三者之间无明显差异。
5、肾小管间质中TGF-β1的表达正常肾组织几乎不表达TGF-β1,模型组TGF-β1表达呈显著性增多。温阳活血治疗组、桃仁治疗组、肉苁蓉治疗组和蒙诺组与模型组相比较,均可降低TGF-β1的表达量;而且蒙诺治疗组、温阳活血治疗组表达量显著低于桃仁治疗组、肉苁蓉治疗组。
6、肾小管间质中CTGF的表达与正常组相比较,造模各组CTGF表达呈显著性增高。与模型组相比较,温阳活血治疗组、桃仁治疗组和蒙诺治疗组的CTGF表达量均降低;温阳活血治疗组、桃仁治疗组与蒙诺组相比无显著差异,但温阳活血治疗组CTGF的表达水平较桃仁治疗组显著降低。
结论:1.温阳活血方可能通过抑制NF-κB、TGF-β1、CTGF的表达,从而减轻NAG、β2-MG的排出,减轻肾小管上皮细胞的损害,保护肾小管功能,减缓间质纤维化的进展。
2.桃仁可能通过抑制NF-κB、TGF-β1、CTGF的表达,从而减轻NAG、β2-MG的排出,在温阳活血方中起主要作用。