铁皮石斛液体悬浮培养和人工种子的研究

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铁皮石斛(Dendrobium candicum Wall. ex Lindl.)为兰科多年生附生草本植物,是一种极其珍贵的药用植物。铁皮石斛自然繁殖率低,加之长期无节制采挖,其野生资源日益减少;传统的繁殖方式如分株、扦插等繁殖率也较低;组织培养技术能在一定程度上解决快速繁殖的难题,但是依然存在转接次数多、生产周期长、成本高、移栽成活率低等问题。本试验在液体培养基中分别添加不同浓度的活性炭、硫代硫酸钠和聚乙烯吡咯烷酮进行培养,研究其对铁皮石斛原球茎增殖、褐变和分化等的影响;再以海藻酸钠和硝酸钙包埋增殖获得的原球茎制作人工种子,研究不同人工种皮配方、基本培养基、碳源、多菌灵、活性炭等对人工种子萌发的影响以及脱落酸对人工种子贮藏的影响。主要研究结果如下:1.添加活性炭能显著提高原球茎的增殖率和控制褐变,但是原球茎分化较严重;硫代硫酸钠能较好地控制原球茎褐变,但是显著抑制增殖;聚乙烯吡咯烷酮能显著促进原球茎增殖,有效控制褐变,适宜作为添加物用于铁皮石斛原球茎液体悬浮培养,其中以0.05g/L为较优浓度,原球茎增殖率为120.7%,褐化率为25.9%。2.用2%海藻酸钠包埋的铁皮石斛人工种子硬度小、易粘连,虽然萌发率较高,但是营养物质泄漏严重;4%海藻酸钠制作的人工种子硬度高、边缘不整齐、有拖尾现象,虽然营养物质泄漏率较低,但萌发率也较低;3%海藻酸钠与50mmol/L硝酸钙制成的人工种子硬度较小,营养物质泄漏率较高;3%海藻酸钠与100和150mmol/L硝酸钙制成的人工种子形状规则整齐,营养物质泄漏率和萌发率均处于较优水平,其中以3%海藻酸钠与100mmol/L硝酸钙反应25mmin为制作铁皮石斛人工种皮的最佳条件。3.MS作为基本培养基的人工种子萌发率最高,但是与1/2MS和1/4MS差异不显著。4.以麦芽糖作为人工种子的碳源萌发率最高,蔗糖、果糖和葡萄糖与麦芽糖效果相近,乳糖作为碳源的人工种子萌发率明显低于前四种糖类,可溶性淀粉作为碳源效果最差,其萌发率仅略高于空白对照。不同蔗糖浓度中以3%最好,低浓度和高浓度的蔗糖均不利于人工种子的萌发。5.低浓度多菌灵不能有效控制菌类生长,铁皮石斛人工种子污染率高,萌发率较低;高浓度的多菌灵虽能有效抑制菌类生长,人工种子未发生污染,但是多菌灵对人工种子的毒害作用导致人工种子的非污染坏死率高,因而其萌发率也较低;0.3%和0.4%的多菌灵能将人工种子的污染率和非污染坏死率都控制在较低水平,因而其处理的人工种子在基质上萌发率高,萌发率分别达到86%和87%。6.添加高浓度活性炭的人工种子萌发迟缓,萌发率低,添加低浓度的活性炭可以提高铁皮石斛人工种子的萌发率,添加0.2%活性炭的人工种子萌发率达到99%。7.在铁皮石斛人工种子中添加20mg/L脱落酸,在4℃冰箱中贮藏6个月后,人工种子的萌发率仍可达到45%,而不添加脱落酸的处理萌发率降为0。
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