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紫心甘薯(purple-fleshed sweet potato)是栽培甘薯[Ipomoea batatas(L.)Lam.]中一个具有独特遗传性状和经济价值的特色品种类型,因其块根富含花青素(cyanidin),块肉呈深紫色而得名。转录调控是真核生物基因表达调控的重要方面,而转录因子在转录调控过程中起着中心作用。转录因子是一类调控蛋白质,其通过单独或与其它蛋白质形成复合体并与特定基因的调控元件结合来调控基因的表达。研究表明,植物花色素苷的生物合成相关酶的基因表达受到MYB、bHLH和WD40等转录因子的调控,本论文拟采用拟酵母双杂交实验和荧光共振能量转移实验来探讨紫心甘薯花青素合成中IbMYB、IbbHLH2和IbWD40之间的互作关系,并通过瞬时转化烟草实验来研究它们之间的相互作用与花青素积累的关系。 本论文获得了以下主要的研究结果: 1.酵母双杂交实验的结果表明,在添加1 mM3-AT的SD/-Trp/-Leu/-His固体培养基上AH109/pBDbHLH2+pADMYB和AH109/pBDWD40+pADMYB均可长出菌落,而AH109/pBDbHLH2+pADWD40未出现菌落。说明,IbMYB可分别与IbbHLH2和IbWD40发生相互作用,但IbbHLH2与IbWD40不发生相互作用; 2.荧光共振能量转移实验的结果证实, CFPMYB分别与YFPbHLH2和YFPWD40在核内共定位,在同一个光路通道中,用405 nm的激发光激发CFPMYB时,YFPbHLH2和YFPWD40均出现了荧光,证实发生了荧光共振能量转移;而激发CFPbHLH2时,YFPWD40未出现荧光。说明,IbMYB可分别与IbbHLH2和IbWD40发生相互作用,但IbbHLH2与IbWD40不发生相互作用; 3.瞬时转化烟草实验的结果表明,分别瞬时转化pGreenⅡ62-SK-MYB+pGreenⅡ62-SK-bHLH和pGreenⅡ62-SK-MYB+pGreenⅡ62-SK-WD40,注射孔及周围的叶片颜色均有不同程度的加深,说明IbMYB+IbbHLH2和IbMYB+IbWD40能够促进烟草叶片花青素的合成。但瞬时转化pGreenⅡ62-SK-IbbHLH2+pGreenⅡ62-SK-WD40后,注射孔及周围的叶片颜色无明显的加深,说明IbbHLH2+IbWD40不能够促进烟草叶片花青素的合成。 4.为了在甘薯中验证MYB、bHLH2和WD40之间的互作关系及与花青素合成的关系,本文诱导获得了甘薯品种‘徐薯18’的胚性愈伤组织,进行了继代培养并得到了胚性细胞悬浮培养系,为‘徐薯18’的遗传转化提供了材料。