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乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染可诱发肝炎、肝硬化,甚至肝癌,是严重威胁人类健康的疾病之一。在HBV相关研究中,研究人员建立了一系列HBV感染的细胞和动物模型。虽然这些模型极大地推动了HBV致病机制的研究,并为抗HBV治疗药物的开发做出了不可磨灭的贡献,但是目前应用的HBV感染模型由于缺乏与人类相同的自然感染过程,因此,无论在机制研究还是药物开发应用中,都无法完全胜任。研究发现,钠离子/牛黄胆酸共转运多肽(NTCP)是HBV感染肝细胞的重要功能受体。NTCP迅速成为抗HBV新药研究的重要靶标,同时也为研究建立新型的HBV感染模型提供了靶向。实验研究已证实,表达人NTCP的HepG2细胞和Huh7细胞可被HBV感染。本课题研究中,为探索人NTCP能否介导HBV感染食蟹猴原代肝细胞,首先将人NTCP基因克隆到慢病毒包装载体后包装成慢病毒;然后借助慢病毒将人NTCP导入HepG2和Huh7细胞,细胞DNA和RNA的探针法real-time PCR检测结果和蛋白质水平的蛋白质印迹检测结果表明人NTCP可在细胞内表达;将表达人NTCP的上述细胞与HBV共培养,细胞培养上清HBsAg的ELISA定量结果表明,表达人NTCP的HepG2和Huh7细胞能够被HBV感染。然后,将人NTCP基因借助慢病毒导入食蟹猴原代肝细胞,细胞DNA和RNA的探针法real-time PCR检测结果表明人NTCP不能在肝细胞内表达,可能的原因是食蟹猴NTCP抑制了人NTCP的表达。最后,借助CRISPR/Cas9技术敲除食蟹猴NTCP,并再次将人NTCP导入肝细胞内,细胞DNA和RNA的探针法real-time PCR检测结果表明在敲除食蟹猴NTCP后,人NTCP可以在肝细胞内表达;然后用HBV感染表达人NTCP的肝细胞,细胞培养上清HBsAg的ELISA定量结果表明,表达人NTCP的肝细胞不能被HBV感染。综上,人NTCP可以介导HBV感染HepG2细胞和Huh7细胞,但是不能介导HBV感染食蟹猴原代肝细胞,这提示,NTCP发挥介导HBV感染作用时需要协同因子的共同作用。