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背景:结核病(Tuberculosis,TB)是结核分枝杆菌(Mycrobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的人畜共患传染病,肺泡上皮细胞是Mtb感染的靶细胞之一。lOkDa培养滤液蛋白(C ulture filtrate protein 10,CFP10)和 6kDa早期分泌性抗原靶蛋白(Early secretary antigenic target-6 kDa,ESAT6)都是减毒牛型结核分枝杆菌(Bacille Calmette-Guerin,BCG)缺失的毒力蛋白。Toll样受体(Toll-likereceptors,TLRs)途径对结核分枝杆菌感染宿主引起的炎性反应有重要的调控作用。目的与方法:本研究利用原核表达系统诱导表达并纯化CFP10和ESAT6蛋白。使用重组蛋白以及BCG处理人肺泡上皮细胞A549,利用实时荧光定量PCR、Western blot以及ELISA等技术分析TLRs信号通路关键分子及其下游炎症因子的变化,以期初步探究CFP10、ESAT6蛋白在结核分枝杆菌感染肺泡上皮细胞过程中对TLR信号通路的影响。结果:(1)经过诱导条件及纯化条件的优化,成功获得高纯度CFP10及ESAT6蛋白。(2)单独使用重组蛋白处理A549细胞时,CFP10显著上调TLR2、TLR4、MyD88、IRAK1、TRAF6和NF-κB p65的表达,下调TICAM1、TRAF3及TBK1等分子的表达,促进IL-6、TNF-α等炎性因子的分泌。ESAT6 显著下调TLR2、TLR4、MyD88、IRAK1、TRAF6、NF-κB p65、TICAM1、TRAF3、TBK1及IRF3的表达,抑制细胞IL-6、TNF-α等炎性因子的分泌。说明CFP10、ESAT6均被可Toll样受体识别进而对A549细胞TLR信号途径产生影响。(3)BCG感染A549细胞后激活了TLR信号途径信号传递,促进了炎性因子的分泌。在BCG感染细胞模型下,CFP10 进一步显著上调TLR2、TLR4、MyD88、IRAK1、TRAF6、NF-κB p65、TICAM1、TRAF3、TBK1和IRF3等分子的表达,增强A549细胞TLR信号通路的信号传递,促进IL-6、TNF-α等炎性因子的分泌。但ESAT6 显著抑制TLR2、MyD88、IRAK1、TRAF6、NF-κB p65、TICAM1、TRAF3、TBK1以及IRF3的表达,从而抑制A549细胞IL-6、TNF-α等炎性因子的分泌。CFP10和ESAT6共同处理时呈现出与ESAT6处理时的相似趋势。结果说明CFP10增强了BCG感染A549细胞时TLR信号途径介导的炎性反应,而ESAT6或者两种蛋白共处理却抑制了BCG感染所导致的A549细胞炎性反应。(4)CFP10、ESAT6能够诱导A549死亡,且随着蛋白处理浓度增加和处理时间加长细胞存活率逐渐降低,且相同浓度和时间条件下,两蛋白共处理细胞存活率高于CFP10或ESAT6处理组。(5)CFP10、ESAT6蛋白对A549细胞TLR信号通路以及炎性反应的不同结果提示,在结核分枝杆菌感染肺泡上皮细胞过程中,CFP10与ESAT6对Toll样受体通路的影响对细胞的炎性反应具有重要的调控作用,并且两种蛋白共同处理时能发挥与单独蛋白处理时不同的作用。结论:CFP10和ESAT6蛋白,可以通过MyD88依赖和MyD88非依赖性途径对A549细胞Toll样信号通路进行调节,进而影响炎性因子的表达。并且CFP10和ESAT6存在相互作用能够影响各自的功能。上述研究为加深对Mtb致病机理及抗结核免疫机制的理解进一步奠定理论基础。