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目的:本研究通过首先建立糖尿病(DM)动物模型,进而发展为糖尿病肾病(DN),应用益气养阴活血中药对该模型进行干预,通过观察实验动物的空腹血糖、24小时尿蛋白定量、尿β2微球蛋白、血清果糖胺、血脂、肾功能、肾脏病理形态学变化、肾皮质中糖基化终产物(AGEs)及其受体mRNA(RAGE-mRNA)等的表达,研究益气养阴活血中药对糖尿病肾病的治疗作用及其可能机制,为其临床应用提供实验基础和理论依据。方法:选用清洁级雄性健康SD大鼠40只,体重200g±20g,普通饲料适应性喂养一周,代谢笼取尿检测尿糖和尿蛋白均为阴性,随机抽10只为正常对照组(normal group,Normal),其余30只按60mg·kg-1腹腔注射链尿佐菌素(STZ),72h后尾尖取血,测定血糖,取尿测尿糖。血糖≥16.7mmol·L-1,尿糖阳性,尿蛋白阳性,尿量大于正常组150%视为成模。将成模大鼠随机分为:糖尿病肾病模型组(DN-Modol group,Model)、中药复方治疗组(Chinese herbal compound group,ZY)、贝那普利治疗组(Benazepril group,Benazepril),n=10。各组均不给予任何降糖西药。治疗各组在成模后一周开始按成人剂量的20倍给药,正常组和模型组给予相应量的蒸馏水灌胃(1ml/100mg),各组共给药8周。于第8周末用代谢笼收集24小时尿液,检测24小时尿蛋白(urinary protein,Upro)定量及尿β2微球蛋白(尿β2-MG)。最后一次给药后,禁食8小时,腹主动脉取血,分离血清,检测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),血肌酐(serum creatinine,Cr),血总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、血清果糖胺(FMN)、血白蛋白(ALB)。无菌操作取肾脏,去掉包膜摘取肾脏称重计算肥大指数,取小块的肾组织固定,甲醛固定用于观察肾脏病理改变及免疫组织化学方法检测肾皮质糖基化终产物(AGEs)的表达;液氮固定用于RT-PCR检测糖基化终产物受体mRNA(RAGE-mRNA)的表达。血、尿生化指标均用全自动生化分析仪测定。结果:1实验大鼠的一般情况正常组大鼠饮食正常,眼睛有神,反应敏捷,被毛紧披,肌肉丰满,粪便成麦粒状,尿量正常。其余3组注射STZ后,均出现明显的多饮多食多尿症状,并慢慢出现精神萎靡,反应迟钝,少动抱团。实验最后一周,与正常组相比造模各组大鼠明显体型瘦小,骨骼突出,肌肉偏少,上述症状以模型组最为显著。2各组大鼠体重、右肾重、肥大指数(肾重/体重)的比较模型组、贝那普利组、中药组大鼠体重比正常组明显偏轻(P<0.01),而三个造模组各组之间大鼠体重无显著性差异(P>0.05);正常组与造模各组大鼠右肾重无显著性差异(P >0.05);模型组、贝那普利组、中药组大鼠肾脏肥大指数与正常组相比明显偏高(P<0.01),而模型组与两个治疗组之间无显著性差异(P >0.05)。3各组大鼠空腹血糖(FPG)的比较模型组FPG明显高于正常组,有显著性差异(P<0.01),经用药干预后,两治疗组与模型组相比无显著性差异(P>0.05)。贝那普利组与中药组相比无显著性差异(P>0.05)。4各组大鼠血白蛋白(ALB),24小时尿蛋白定量(UPRO)及尿β2微球蛋白(尿β2-MG)的比较模型组及治疗组大鼠血浆白蛋白明显低于正常组,但两个治疗组的血浆白蛋白值明显高于模型组,P<0.05,两组之间比较无显著性差异;模型大鼠尿蛋白定量明显高于正常组,经两药治疗后尿蛋白定量明显下降,两个治疗组大鼠尿蛋白定量明显低于模型组,P<0.05,但中药治疗组要高于贝那普利组;尿β2微球蛋白的结果与尿蛋白定量基本一致。5各组大鼠血清果糖胺(FMN)的比较模型组、贝那普利组、中药组各组大鼠血清果糖胺比正常组明显升高(P<0.01),而模型组、贝那普利组、中药组之间无显著性差异(P>0.05)。6各组大鼠血脂的比较造模各组血清总胆固醇(TC)明显高于正常组(P<0.01),中药组比模型组明显偏低(P<0.01),而贝那普利组与模型组之间比较无显著性差异(P>0.05)。对于甘油三酯(TG),两个治疗组均低于模型组(P<0.01),而两个治疗组与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。7各组大鼠肾功能的比较与正常组相比,模型组肌酐(Scr)明显升高,有显著性差异(p<0.05)。治疗组与模型组相比明显下降,有显著性差异(p<0.05)。中药组和贝那普利组之间无明显差异(p>0.05)。对于尿素氮(BUN),两治疗组与正常组也均明显低于模型组(p<0.01),而与正常组相比,贝那普利组和中药组则有所升高(p<0.01),两者之间的升高水平无显著性差异(p>0.05)。8肾脏病理形态学观察正常组肾小球结构完整,未见肾小球肥大,肾小球毛细血管基底膜、系膜、基质未见明显异常改变;模型组可见肾小球肥大,肾小球毛细血管基底膜增厚,肾小球系膜细胞增生、系膜基质增多,系膜区增宽;贝那普利组与中药复方治疗组也均有不同程度病理改变,但与模型组相比病变较轻。9免疫组化观察结果AGEs弥散分布于肾小管内,肾小球内基本无表达。半定量分析结果显示,与正常组相比,模型组的表达要明显加强(P <0.01),而两个治疗组的表达也明显强于正常组(P <0.01),贝那普利组和中药治疗组之间的比较则无明显差异(P>0.05)。10 PT-PCR分析结果结果显示:正常组中RAGE-mRNA基本无表达,模型组出现高表达条带,而与模型组相相比,中药组和贝那普利组肾脏中RAGE-mRNA表达均有所下降。结论:1益气养阴活血中药可以减少糖尿病大鼠的尿蛋白,升高血白蛋白,降低血清TC,TG,改善脂质代谢;降低血清果糖胺;降低BUN及Scr,保护肾功能。2益气养阴活血中药可以有效的抑制DN大鼠肾小球毛细血管基底膜的增厚、系膜基质的增生以及足细胞的融合,延缓肾脏病理的进展。3益气养阴活血中药可以抑制DN大鼠肾组织中AGEs的表达。4益气养阴活血中药可以抑制DN大鼠肾组织中RAGE-mRNA的表达,提示益气养阴活血中药可能通过抑制AGEs的产生以及AGEs与RAGE-mRNA之间的氧化应激反应从而抑制DN的进展。