【摘 要】
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酸性磷酸酶(Acidphosphatase,ACP)是一类在酸性条件下催化磷酸单酯水解的酶。酸性磷酸酶在基因结构水平上还可分为五种:红细胞型、溶酶体型、前列腺型、巨噬细胞型和破骨细胞型。酸性磷酸酶5(ACP5),又称为抗酒石酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,Tr ACP或Tr AP)是酸性磷酸酶的第五型高保守金属蛋白酶。目前有关ACP5的研究集中于
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酸性磷酸酶(Acidphosphatase,ACP)是一类在酸性条件下催化磷酸单酯水解的酶。酸性磷酸酶在基因结构水平上还可分为五种:红细胞型、溶酶体型、前列腺型、巨噬细胞型和破骨细胞型。酸性磷酸酶5(ACP5),又称为抗酒石酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,Tr ACP或Tr AP)是酸性磷酸酶的第五型高保守金属蛋白酶。目前有关ACP5的研究集中于骨质免疫性疾病与骨肿瘤乃至恶性肿瘤的研究与应用,但在硬骨鱼类有关ACP5的研究与应用较少。本研究对美国红鱼(Sciaenops ocellatus)的酸性磷酸酶5(SoACP5)进行了基因克隆、鉴定,并且SoACP5体内外的功能进行了分析和研究。结果如下:(1)SoACP5的开放阅读框为1002 bp,编码333个氨基酸,预测蛋白质大小为33.96 k Da。氨基酸序列比对结果显示:SoACP5基因的氨基酸序列与其他物种ACP5的同源性高达68.77%~96.70%,说明SoACP5基因在物种进化过程中有一定的保守性。系统进化分析显示:美国红鱼SoACP5与大黄鱼的亲缘关系最近。(2)构建了SoACP5原核表达载体并经诱导表达获得重组蛋白r SoACP5,并对r SoACP5的酶活进行了测定。结果显示:SoACP5酶活性的最适p H为5,最适温度为55℃;最适辅助金属离子为Ca2+离子;且磷酸酶活性对Ca2+离子呈浓度依赖性。MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑)测定SoACP5对外周血白细胞增殖的影响,结果显示,r SoACP5可以显著促进美国红鱼外周血白细胞的增殖。(3)qPCR结果显示:SoACP5在美国红鱼肝、脾、肾等8个组织中均有表达,其中表达量在鳃中最高,然后是脾脏、心脏、肠、头肾、脑、胃,在肝脏中最低。在迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)感染美国红鱼12 h后,SoACP5在肝脏中表达量达到峰值,其表达上调20.11倍;而在脾和头肾中感染24 h时,其表达量最高,脾中表达上调20.25倍,头肾表达上调16.18倍。(4)构建SoACP5过量表达载体和干扰表达载体,研究其在美国红鱼体内的抗菌作用。结果表明:SoACP5过量表达可以抑制迟缓爱德华氏菌生长;相反,当干扰SoACP5的表达时,迟缓爱德华氏菌的感染数量显著增加。综上所述,SoACP5在美国红鱼抗细菌免疫中具有重要作用,研究结果为美国红鱼抗病原免疫提供新的思路,有助于促进美国红鱼养殖的健康可持续发展。
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