【摘 要】
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目的:（1）构建小鼠绝经后骨质疏松（PMOP）肾阳虚证模型;（2）证实中医经典温补肾阳方剂金匮肾气丸改善骨脂代谢平衡治疗小鼠PMOP肾阳虚证的疗效及机制。方法:（1）动物模型建立:为构建小鼠PMOP肾阳虚证模型,14只6周龄的C57/BL6小鼠适应性饲养2周后,随机分为假手术组、去卵巢组,每组各8只,观察小鼠肾阳虚证候特征,统计肛温、饮水量、摄食量、垫料湿重的证型量化指标;8周后取材,micro-
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目的:（1）构建小鼠绝经后骨质疏松（PMOP）肾阳虚证模型;（2）证实中医经典温补肾阳方剂金匮肾气丸改善骨脂代谢平衡治疗小鼠PMOP肾阳虚证的疗效及机制。方法:（1）动物模型建立:为构建小鼠PMOP肾阳虚证模型,14只6周龄的C57/BL6小鼠适应性饲养2周后,随机分为假手术组、去卵巢组,每组各8只,观察小鼠肾阳虚证候特征,统计肛温、饮水量、摄食量、垫料湿重的证型量化指标;8周后取材,micro-CT检测椎体骨微细结构证实小鼠PMOP模型的建立。（2）治疗实验:为证实金匮肾气丸是否通过改善骨脂代谢平衡治疗小鼠PMOP肾阳虚证,7周龄雌性C57BL/6小鼠适应性饲养1周后,随机分为三组,分别为:假手术组（去除卵巢周围脂肪）;模型组（小鼠PMOP肾阳虚证）;金匮肾气丸组（小鼠PMOP肾阳虚证模型建立后,金匮肾气丸治疗4周）。假手术组和模型组小鼠灌胃等量生理盐水,连续4周。观察小鼠肾阳虚证候特征,统计肛温、饮水量、摄食量、垫料湿重的证型量化指标。三组小鼠在12周时均被实施安乐死并取材,采用micro-CT检测椎体骨微细结构,H&E染色检测骨组织形态学,并量化分析椎体成骨细胞和脂肪细胞的数量和比例;采用q PCR检测椎体Akt及成骨基因Wnt10b、Osterix（Osx）的表达,成脂基因Fndc5、Pparγ和Fabp4的表达;采用Western blot检测Akt、磷酸化-Akt（p-AKT）,椎体成骨指标BMP2、COL1A1,成脂指标Fndc5的蛋白表达。结果:（1）构建小鼠PMOP肾阳虚证模型:①小鼠PMOP肾阳虚证评估:去卵巢8周后的小鼠呈现出以下至少三种症状或体征:毛发失去光泽或稀疏而直立的毛发,精神萎靡,不愿意移动,反应迟钝,摄食量或饮水量减少。对相关症状和体征进行量化评估后,发现肛温下降（P<0.05）、垫料湿重增加（P<0.05）,饮水量和饮食量有下降的趋势。②腰椎Micro-CT分析:三维重建图像显示,与假手术组相比,去卵巢组术后8周椎体骨微细结构破坏,骨小梁间距扩大,松质小梁骨骨量丢失显著。对三维重建的图像进行量化分析显示:与假手术组相比,去卵巢组术后8周,骨体积分数（BV/TV）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）减少,骨小梁分离度（Tb.Sp）、增加,差异均具有统计学意义（P<0.05）。（2）金匮肾气丸改善骨脂代谢平衡治疗小鼠PMOP肾阳虚证:①小鼠PMOP肾阳虚证评估:金匮肾气丸灌胃后,可以改善小鼠的肾阳虚证候,小鼠肛温升高（P<0.05）,垫料湿重降低（P<0.05）,饮水量和饮食量有升高的趋势。②小鼠腰椎Micro-CT分析:金匮肾气丸干预后,骨小梁增粗,骨小梁变厚和骨小梁间距变小,BV/TV、Tb.N、Tb.Th均升高（P<0.05）,骨表面积和组织体积的比值（BS/TV）有升高的趋势,Tb.Sp、结构模型指数（SMI）有降低的趋势。③小鼠腰椎H&E染色分析:金匮肾气丸干预处理后,骨小梁有一定程度的增加、脂肪空泡减少。对骨组织形态进行量化分析表明,金匮肾气丸可以增加成骨细胞数量（Ob.N/BS）和成骨细胞面积（Ob.S/BS）,降低脂肪细胞数量（adipocytes/tissue area）和脂肪细胞面积（adipocytes area/tissue area）,差异均具有统计学意义（P<0.05）。④小鼠腰椎椎体骨q PCR分析:金匮肾气丸干预后,Akt表达有下降趋势,成骨相关基因Wnt10b增加（P<0.05）,Osx有增加的趋势,脂肪生成相关基因Fndc5下降（P<0.05）,Pparγ、Fabp4有下降的趋势。⑤小鼠腰椎蛋白表达分析:金匮肾气丸处理后,p-AKT蛋白表达增加（P<0.05）,成骨相关蛋白BMP2表达增加（P<0.05）,COL1A1蛋白有增加的趋势,成脂相关蛋白FNDC5蛋白表达降低（P<0.05）。结论:（1）动物模型建立:C57小鼠（8周龄）去卵巢手术8周后可以建立小鼠PMOP肾阳虚证模型。（2）治疗实验:金匮肾气丸可能通过AKT通路调控骨脂代谢治疗小鼠PMOP肾阳虚证。
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